本发明涉及抗原抗体接合物，尤其是单克隆抗原抗体接合物，涉及这类接合物的制备和用途。

在先有技术中，已将若干物质用作载体分子，然而，其作为治疗剂的释放系统却收效甚微。业已采用的载体分子类的地位处于各种各样的药物或胞毒剂和抗生素类的交合点。所述载体分子包括DNA、脂质体，诸如破伤风类毒素蛋白质、类固醇激素和抗体。这类系统可单独使用，或者在各种佐剂（例如Freund′s补体佐剂）的参与下使用。这类系统之所以收益甚微是因为缺乏靶目标特异性，因而降低了体内效力。此外，许多载体分子代价昂贵，并且在某些情况下管理机构禁止使用。已有报道，掺了Freund补体佐剂的乳剂会引起脓肿或形成肉芽瘤进而导致躯体损伤，使矿物油残余物存留在躯体内，和/或使动物呈T·B阳性。显然，这些不利之处严重地限制或妨碍了人们接受食用性屠宰动物。另外，所产生的免疫效应可能不十分显著，其质量可能受到影响，不够稳定，对远系繁殖的动物尤其如此。

根据先有技术，当将释放化合物对特定细胞取向时，可采用抗体作为载体分子。虽然这一系统具有某种改进之处，但缺乏特异性仍然是一个弱点，并且先有技术的重点一直放在胞毒剂和药物的释放上。

此外，利用单克隆抗体作为载体的先有技术的特点在于：同活性化合物键合的共价键系统。这就产生了一系列复杂的难题，即：抗体特异性的改变，和/或接合的化合物活性的改变，和/或其后的卵裂和激活的改变。例如，当靶目标系统为体内部分时，不能保证所接合的化合物以其活性状态释放。

因此，本发明的目的在于克服或者至少减轻与先有技术有关的一个或多个缺点。

本发明的第一个方面是提供了一种抗原-抗体接合物，它包括：至少一种抗原;和至少一种对于至少一种主组织相容性复合体（MCH）Ⅰ类或Ⅱ类抗原具有特异性的单克隆抗体;所述至少一种单克隆抗体与至少一种抗原接合。

所述主组织相容性复合体Ⅰ类为糖蛋白，它存在于人和动物的各种组织和细胞上。现已在人类中和小鼠中确定了三种原始的Ⅰ类基因产物（人类基因称为HLA-A，-B，-C和鼠类基因称为H-2K，-D，-L）。

所述主组织相容性复合体Ⅱ类抗原系糖蛋白，它可呈现于B-细胞，激活的T淋巴细胞或产抗原细胞的表面。所述产抗原细胞包括单核细胞、巨噬细胞和B·淋巴细胞。已在小鼠中鉴别出两处彼此不同的Ⅱ类抗原I-A和I-E，而在人体中已确定了至少三种或四种彼此不同的Ⅱ类抗原（HLA-DR，-Q，-DP）。

可对至少一种单克隆抗体进行修饰，以便同至少一种抗原接合。例如，当抗体为Ig    G或Ig    M同型抗原的抗体时，可将联结子与其糖末端接合。可修饰糖末端（例如通过其氧化），以便同联结子子接合。

所述的至少一种单克隆抗体可以是小鼠单克隆抗体。至少可以将一种单克隆抗体培养成抗羊的MHCⅡ类分子的抗体。

所述的对至少一种MHCⅡ类抗原具有特异性的至少一种单克隆抗体选自单克隆抗体SBUⅡ28-1，37-68，38-27，42-20和49-1。除了系IgG-2a的SBUⅡ37-68和49-1外，上述所有的单克隆抗体均为IgGl同型抗原的抗体。所有的单克隆抗体（除单克隆抗体SBUⅡ49-1之外）对羊的Ⅱ类分子的四种特殊亚型之一种具有识别能力。单克隆抗体SBU49-1对于Ⅱ类分子的所有四种亚型具有识别能力。

所述的对至少一种MHCⅠ类抗原具有特异性的至少一种单克隆抗体可选自单克隆抗体SBUⅠ41-17，41-19，47.3和41-28。Gogolin-Ewens等〔见（1985）Immunology，56：714-224〕和Puri等〔见（1987）Vet.Immunol.Immunopathol.15：59-86〕均已描述了这些单克隆抗体。上述单克隆抗体样品保藏于Culture    Collection，Universisty    of    Melbourne，Department    of    Veterinary    Science    Parkville，Victoria，Australia。

所述的至少一种抗原可以是任何适宜的类型。至少有一种抗原可选自蛋白质、肽，包括激素，药剂或胞毒剂，与DNA结合的物质（包括烷基化剂和抗生素类，诸如氨甲喋呤一类的抗代谢剂，作用于细胞表面的物质和蛋白质合成抑制剂。）最好至少有一种抗原是其本身没有抗原活性，但在载体分子存在下产生具有抗原作用的蛋白质或肽。

就特别优选的形式而言，可根据抗原产生免疫应的能力来选择抗原。在这种优选形式中，抗原-抗体接合物仅供单克隆抗体未经过培养的物种使用，因为在这种接况下，单克隆抗体本身可起免疫作用。例如，上述单克隆抗体是在小鼠中培养的，因此这类抗体对于其他动物（例如包括羊内的家禽动物）以及人而言是抗体的。

于是，所述的至少一种抗原可选自这样的抗原，即：它们通常需要一种载体分子和/或佐剂来显示免疫能力。然而，这类载体分子和/或佐剂可能不是必需的。单克隆抗体可取代载体分子和/或佐剂。

此外，如前所述，采用小鼠的Ⅱ类单克隆抗体-抗原接合物，可导致对于免疫细胞的特定取向，从而能获得一种对几乎不致免疫的抗原产生单克隆抗体的新途径。

尽管我们不愿被理论所限制，但可以假定，Ⅱ类单克隆抗体同所期望的化合物接合时，很有可能是通过以下方法提高免疫能力的，（ⅰ）适宜的B和/或T细胞表位，该细胞表位引起对小鼠免疫球蛋白质的免疫应答，其中免疫球蛋白增进了对接合蛋白质或肽的免疫应答。

（ⅱ）对表示Ⅱ类分子的免疫效应器细胞的特定取向效应。所述细胞包括单核细胞、巨噬细胞、B细胞或激活T细胞。这样，很可能导致：a）比通常用于激发免疫应答所需剂量低得多的抗原;

b）在给定物种成员间可复制的应答;

c）施用可溶的抗原抗体接合物，即：不需要FCA或其他佐剂或油性乳剂。

就优选的形式而言，所述的至少一种抗原可选自激素、其类似物或衍生物。所述的至少一种抗原可选自激素，包括：卵泡刺激素（FSH），这是一种可用来调节动物生殖功能的激素;促黄体激素释放激素（LH-RH）和/或FSH或促黄体激素（LH）的片断，例如它们的亚单位，这是可用于使动物无性欲的激素;或生长激素调节激素，它们包括脑激素，其类似物、片断或衍生物。

所述的至少一种抗原可以的肽。这种肽可以是合成肽。这种肽可取自Foot    and    Mouth    Disease    Virus（FMDV）VPI表面蛋白质〔Bittl    et    al.（1982），Nature    298：30-33;Francis    et    al.，1987Nature    300：168-170;Clark    et    al    1987    Nature    300：381-384〕。就产生充分的和/或稳定的免疫应答而言，在先有技术中已遇到了不少难题。

此外，本发明涉及连续将各种动物产生的抗体用于应答以去性欲、生长促进、FMDV或任何其他单克隆抗体为基础的疫苗。这些抗体可以用于激素和/或其他诊断检验，其应用形式既可以是取自免疫动物的血清（即杂交瘤诱导的单克隆抗体），也可以是经过纯化并经过合适诱导的可溶抗体，或是固定在标准固体基质载体上的抗体。

可对所述的至少一种抗原进行修饰，以便以任何适宜的方式使其与克隆抗体接合。

可以按任何适宜的方式进行所述的至少一种单克隆抗体与至少一种抗原的接合。例如，偶联可以呈物理和/或化学类型。利用载体，例如琼脂糖（可从Pharmacia    Chemicals    Pty.Uppsalla，Sweden购得），通过物理手段，可将抗体和抗原偶合。

另外，可通过化学方法将抗原和抗体键合。可采用任何标准的键合系统。可采用抗生物素蛋白-生物素系统一类的键合系统将原连结到单克隆抗体上。

于是，本发明的一个优选内容在于提供了一种制备抗体-抗原接合物的方法，该方法包括：提供至少一种带有酰肼基团的抗原以及至少一种对于至少一种MHCⅠ类或Ⅱ类抗原具有特异性、且带有活性醛基的氧化单克隆抗体;

将所述的至少一种酰肼修饰的抗原同所述的至少一种氧化单克隆抗体混合;

分离由此产生的反应产物。

这一优选接合方法的优点在于：单克隆抗体基本上不受接合作用的影响。特异性或活性未损失或损失极小。

此外，可通过化学途径将所述的抗原键合在载体分子（例如蛋白质A）上。蛋白质A是一种细菌源多肽，对于各种物种（包括小鼠）的免疫球蛋白的FC部分具有亲合力。尤其对属亚纲Ig    G2a，2b或3的小鼠单克隆抗体而言，蛋白质A以高度的亲合力结合，所产生的抗体活性损失最小。例如，对于初级免疫而言，可施用可溶的单克隆抗体SBU    Ⅱ37-68LH-RH酰肼-蛋白质A复合体。第二阶段和/或其后的免疫呈SBU    Ⅱ37-68-LH-RH酰肼-蛋白质A的形式，或者，可采用化学键结合的蛋白质A-LH-RH复合体。

可按任何适宜的方式，形成酰肼修饰的抗原。如果抗原是蛋白质或肽，并且是用合成法产生的，则可将酰肼修饰掺到蛋白质或肽的合成中。

可采用任何适宜的化学或酶促法形成氧化单克隆抗体。可采用氧化催化剂。可以理解到，通过氧化，至少部分地将抗体的糖，修饰为醛基，从而使其与抗原上的酰肼相互作用。

可以理解到，采用本发明的抗体抗原复合体，对特定取向的MHC类Ⅰ或类Ⅱ抗原所产生的免疫应答，导致了无佐剂的免疫应答，与采用非特定的（即非活性的MHC对照物）单克隆抗体所产生的免疫应答相比，所述的无佐剂的免疫应答高出十倍或十倍以上。

本发明的另一个内容是提供了一种抗原-抗体接合物，该接合物包括：至少一种抗原;和至少一种对至少一种主组织相容性复合基因（MHC）类Ⅰ或类Ⅱ抗原具有特异性的单克隆抗体;及至少一种对至少一种非MHC类Ⅰ或类Ⅱ抗原具有特异性的单克隆抗体;

各个抗体与至少一种抗原接合。

可同步地将一种或多种抗原取向于一种或多种淋巴细胞或单核细胞/巨噬细胞抗原（见以下表2）。例如，可将至少一种抗原接合于两种单克隆抗体，包括CD4+细胞在内的CD4类分子，和MHC类Ⅱ分子，从而取向于除了带MHC类Ⅱ分子的单核细胞，巨噬细胞和/或B-淋巴细胞以外的T-辅助（CD4+）细胞。这就增强了体液免疫应答。

此外，可将至少一种抗原接合于两种单克隆抗体、包括CD8+细胞在内的CD8类分子和MHC类Ⅰ分子，从而取向于带MHC类Ⅰ分子的CD8+细胞和/或免疫效应细胞。在本实施方案中，这种取向可增进细胞免疫应答。

采用物理或化学手段使两种不同的单克隆抗体连结，同样可形成本发明的抗原-抗体接合物。所述的不同单克隆抗体的一种对所需的抗原具有特异性，另一种抗体系用来将接合物取向于预定的淋巴细胞抗原或MHC类Ⅰ或类Ⅱ表面分子。

在本发明的另一个实施方案中，通过杂交瘤或“quadroma”形成所述的至少一种单克隆抗体。

在Nature（305：537-540，1983）和Immunol.Today5（10）：299-304，1984）中对Quadromas作了描述。Quadromas能够分泌单个的具双重特异性的（即：对所需抗原和淋巴细胞的靶目标具有双重特异性）单克隆抗体。例如，可产生对MHC类Ⅰ或类Ⅱ抗原和诸如LH-RH之类的激素具有特异性的单克隆抗体。可将这种单克隆抗体与LH-RH反应，所产生的复合体可用于免疫。

上述两个实施方案的优点在于它们均克服了通过化学途径连接抗原和抗体的缺点。

可以理解到，由于激素是小分子，所以激素本身致免疫能力差，为了获得其抗体，在先有技术中必须将激素与比其大得多天然或合成载体分子结合。前述激素包括促黄体激素释放激素（LH-RH）和/或卵泡刺激素（FSH）的亚单位和/或促黄体激素（LH）或它们的片断和/或生长激素（包括生长激素调节激素，例如脑激素）。将激素与各种载体分子结合的若干技术是公知的，但这些技术不易控制，很难获得具有可预测的、稳定质量的接合物。可以理解到，采用了本发明的抗原-抗体接合物后，本身能致免疫的MHC类Ⅰ或类Ⅱ特异性单克隆抗体便可以免去另外将载体分子与诸如LH-RH、LH、FSH和脑激素之类激素结合的必要。此外，因对免疫效应的细胞具有特异性取向，就免去了佐剂，从而可将可溶的抗原施用于动物。

于是，本发明的一个优选内容在于抗原-抗体接合物可包含：至少一种抗原，该抗原是一种激素，选自促黄体激素释放激素（LH-RH）、卵泡刺激素（FSH）、促黄体激素（LH）和脑激素，它们的类似物、碎片或衍生物;和至少一种对于主组织相容性复合基团（MHC）类Ⅰ或类Ⅱ抗原具有特异性的单克隆抗体，和至少一种对于给定物种的CD4或CD8类的分子具有特异性的单克隆抗体。

同样，可将主组织相容性复合基团类Ⅰ或类Ⅱ抗体与下列物质接合，这些物质选自蛋白质和肽，包括激素、药剂或胞毒剂，与DNA结合的物质，包括烷基化剂、抗生素类，诸如氨甲喋呤抗代谢物，作用于细胞表面的物质和蛋白质合成抑制剂。

本发明的药物或兽用组合物可用于人或动物。可以以此来治疗牛、羊、山羊、猫、荷兰猪、猪、狗、驯鹿、马、小鸡、鸭、火鸡和灵长类动物。

本发明的另一个内容是提供了抑制动物生殖功能的方法。该方法包括：提供一种抗原-抗体接合物，该接合物包括：至少一种抗原，和至少一种对于至少一种主组织相容性复合基团（MHC）类Ⅰ或类Ⅱ抗原具有特异性的单克隆抗体，所述的至少一种单克隆抗体与至少一种抗原接合;将有效量的抗原-抗体接合物施用于受治疗的动物。

抑制动物生殖功能的方法可包括：阻止或抑制雌性动物的排卵和/或性欲，阻止或抑制雄性动物的精子生产和/或性行为，

可按疫苗的形式提供该避孕接合物。可采取非肠道途径施用疫苗。非肠道给药包括皮下、肌内或静脉内注射、口服或经皮肤或经植入在动物内或连接于皮肤的微型泵吸收用药。

有效剂量因动物种类和体重的差异而变化。个别动物最佳剂量可利用样品试验来选择。

然而，作为诸如猪和羊一类动物的优选实例，其剂量范围为大约5至30微克适宜地接合的LH-RH或-FSH或LH或它们的碎片。

剂量方案可包括一级接种和随后的一次或多次的二级接种。需要时，可采用激素-抗体接合物形成一级接种;可利用标准激素配方形成二级接种及后续接种。

另外，可采用特殊肽抗原的多倍体。例如，通过在N和C末端加入半胱氨酸残基，可使LH-RH肽或适宜的FSH或LH的肽片断聚合成肽。采用适当的氨基酸作为间隔物，可实现这一合成。利用重组技术，即控制对于原生肽或其特殊表位的编码，在DNA水平构成LH-RH多倍体和/或LH和/FSH亚单位特殊部分的多倍体，以获得重复编码顺序，供具有这种顺序的多倍体使用。

本发明的又一个特征在于提供了：包含脑激素和至少一种对主组织相容性复合基因类Ⅰ或类Ⅱ抗原具有特异性的单克隆抗体的药用或兽用的生长促进接合物;以及至少一种对给定物种的CD4或CD8类的分子具有特异性的单克隆抗体;

各个单克隆抗体与脑激素接合。

可施用脑激素-单克隆抗体生长促进接合物，以促进生长和提高人和包括牛、羊、猪和小鸡在内的动物的食物转化效率。可根据预定的施用方式，单独施用脑激素-单克隆抗体接合物，或将其同各种稀释剂、载体或赋形剂结合起来使用。

有效剂量因动物种类和体重而异。可采用样品试验法，选择具体动物的最佳剂量。

然而，作为猪和羊一类动物用剂量的实例，其剂量范围大约为5至30微克适宜结合的脑激素。

用于生长促进疫苗的生长促进接合物可包括初级接种以及其后的一次或多次二级接种。需要时，可采用激素-抗体接合物进行初级接种。可采用标准激素配方形成二级接种和后续接种。

如以所述，可施用脑激素-单克隆抗体接合物来促进生长和提高人和动物的食物转化效率。还可将该接合物用于治疗哺乳动物的蛋白质积累缺乏症和蛋白质降低症。

现根据以下实施例更充分地描述本发明。然而，应该意识到，以下描述仅为了说明而不是限制上述发明内容。

实施例1    单克隆抗体的生产将各种免疫原用于生产抗体。就单克隆抗体SBUⅡ28-1而言，采用磷酸盐缓冲盐水（PBS），通过肺洗出法收集肺泡巨噬细胞。在PBS中将细胞洗涤三次，每隔一周腹膜内注射5×106至107个细胞，共进行四周。就单克隆抗体SBU·Ⅱ38-27和49-1而言，将取自插入套管的肩胛骨上部的淋巴结输出管，淋巴细胞用作免疫原。免疫时间程序基本同SBU·Ⅱ28-1一致。通过在A·TH和A·TL小鼠中间进行同种异体免疫，培养单克隆抗体SBU·Ⅱ37-68。每隔一周，将取自A·TL小鼠的脾细胞（107）腹膜内注射给A·TH小鼠，共进行六周，并对血清进行测试，以确定羊淋巴细胞活性。随后使具有高滴定率的抗羊淋巴细胞的小鼠增强免疫，用以融合。就单克隆抗体SBU·Ⅱ42-20而言，对小鼠腹膜内注射以及在若干皮下部位注射纯化的淋巴细胞糖蛋白（50μg溶于Freund补体佐剂），每周重复一次，共持续四周。3-4周后使用100μg抗原在Freund补体佐剂中）使小鼠增强免疫。于融合前三或四天，进行5×106细胞或含50μg糖蛋白的PBS的最终静脉内注射。按Galfre等所述的方法〔（1977），Nature，255：550-552〕，进行脾淋巴细胞与P3-NS/1-Ag4-1（NS-1）细胞的融合。有关细胞培养的所有其余步骤如Cogolin-Ewens等在（1985）Immunology（35：717-724）上所叙述。

按Williams，Galfre and Milstein在（1977）Cell（12：663-673）上所介绍的测定法，鉴定杂交上清液抗新鲜羊淋巴细胞的活性。采用三步的放射免疫测定步骤，确定单克隆抗体的同型物，其中，以免抗小鼠IgG亚纲特异血清（Chemicon International，Los Angeles，California）作为第二抗体，以〔125I〕马抗兔F（ab′）2（HAR）作为第三抗体。兔抗小鼠F（ab′）2（RAM）和HAR是由Oxford的A.F.Williams提供的。

将根据上述原则所选择的七种杂交瘤记为SBU·Ⅱ28-1，38-27，38-64，38-30，42-20，37-68和49-1。所有的单克隆抗体均为IgGl同型抗原的抗体，除了系IgC-2a的SBU·Ⅱ37-68和49-1之外。这些单克隆抗体似乎都能识别羊淋巴细胞上的非多型定子。

采用顺序免疫沉淀法，由单克隆抗体SBU·Ⅱ28-1，37-68，38-27和42-20鉴定类Ⅱ分子的四种互不相同的亚型;而另一种单克隆抗体SBU·Ⅱ49-1能识别类Ⅱ分子的所有四种亚型。

实施例2    对单克隆抗体的免疫应答为测定一级免疫应答，于第1天、第3天和第5天，用100μgDE-52纯化单克隆抗体（于0.9%MaCl中）或1mg对照小鼠单克隆IgG（mIgG），对羊进行静脉内注射。为测定二级免疫应答，如上所述，于第14天、16天和18天，用相同剂量的适宜抗原再次对羊进行注射。

采用ELISA测定血清抗体的滴定度。就每一种抗原而言，滴定度范围代表取自三只羊的结果。

表1显示了以单克隆抗体作抗原的免疫结果。

这些结果说明了取向效果，尤其是对以可溶形式施用的抗Ⅱ类抗体的免疫应答比以十倍量施用对照小鼠IgG所产生的免疫应答还高。

表1采用的抗原    血清抗体滴定率免疫接种    第7天    第14天    第21天    第28天

对照小鼠同型抗原IgGl，2a和2b的单克隆IgG实施例3    对单克隆抗体的免疫应答表2表示具有抗原特异性，并可与上述单克隆抗体-抗原复合体一起使用的补充单克隆抗体。

表2由单克隆抗体所限定并适于用外来抗原取向的补充的羊淋巴细胞抗原实例单克隆抗体    抗原特异性    人的抗原（克隆号）    和出版文献    类似物44-38，44-97    SBU-T4（Immunology    55：739-749，1985）    CD4（T4）38-65    SBU-T8（Immunology    55：739-749，1985）    CD8（T8）41-17，41-2841-19，47-3    SBU-MHC    CL.I（Immunology    56：717-24.1985）MHC    Class    Iamd    Vet，Immunol.Immunopathol.1987，15：59-86.

实施例4    对抗原-抗体接合物的免疫应答将抗类ⅡMHC单克隆抗体38-27和37-68同试验抗原（卵白蛋白质）卵白素结合，利用这一接合物形成试验接合物。卵白素因其生物素结合能力成为一种适宜的试验抗原。

利用    标准生物素N＝羟基丁二酰亚胺（NHSS）酯将单克隆抗体38-27生物素化。

利用生物素的氢氧化物将单克隆抗体37-68生物素化。

就初级免疫而言，在7天内，或用1.0mg卵白素或用1.0mg单克隆抗体-卵白素接合物，对羊进行真皮内注射三次。

按用于初级免疫的相同程序，于第70天开始进行二级免疫。

表3记录了抗体的滴定率。显然，抗原-抗体的免疫应答有了十分显著的增强。

现已完成了对各种单克隆抗体-抗原接合物的制备和试验。所述的各种单克隆抗体-抗原接合物包括脑激素与上述单克隆抗体38-27和37-68的接合物。可以得到类似结果，即羊体内高滴定率抗脑激素免疫应答。

表3羊的编号    免疫原    初级抗卵白素    二级抗卵白素滴定率a    滴定率b第7天    第70天16    生物素    1/500    1/500    1/1000171819    38-27：NHSS-    1/5000    1/5000    1/2000020    生物素-卵白素    -1/10000    -1/100022    37-68：NH-NH2    1/10000    1/10000    1/50000生物素-卵白素a）通过ELIZA测定抗体滴定率。就初级免疫而言，在7天内，用1.0mg卵白素或1.0mg单克隆抗体-卵白素接合物（单克隆抗体：卵白素的摩尔比为1∶0.5）。

b）按用于初级免疫的相同程序，于第70天开始二级免疫。

c）采用标准的生物素N-羟基丁二酰亚胺（NHSS）酯，将单克隆抗体38-27生物素化。

d）采用生物素酰肼，将单克隆抗体37-68生物素化。

最后，应该意识到，可作出各种改良和/或变换并不脱离本发明的精神。