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一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法

阅读：594发布：2020-05-08

专利汇可以提供一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，首先配制0.5mg/ml的新型Bt杀虫蛋白(Cry 1Ah)稀释液，然后向其中加入有机硅表面活性剂，使其在稀释液中的浓度为0.1％，接着用喷壶将Bt蛋白稀释液喷在饲养桃蚜的豌豆苗上，让桃蚜体表布满Bt蛋白稀释液。室温放置2h后，用上述处理过的桃蚜饲养瓢虫，以饲喂喷浓度为0.1％有机硅表面活性剂的桃蚜为对照。通过比较处理组和对照组饲养瓢虫幼虫的存活率、幼虫历期、蛹历期、体重，雌雄成虫寿命以及雌虫产卵量等生命指标来评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫幼虫和成虫的影响。本方法适用范围广，具有很强的实用性。，下面是一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)首先配制0.4-0.6mg/ml的新型Bt杀虫蛋白Cry 1Ah稀释液；
2)然后向其中加入有机硅表面活性剂，使其在稀释液中的浓度为0.1％；
3)接着用喷壶将Bt蛋白稀释液喷在饲养桃蚜的豌豆苗上，尽量让桃蚜体表布满Bt蛋白稀释液；
4)室温放置1.5-2.5h后，用上述处理过的桃蚜饲养瓢虫，以饲喂仅喷浓度为0.1％有机硅表面活性剂的桃蚜为对照；
5)将初孵的瓢虫幼虫单头接入烧杯中，分别饲喂处理和对照的桃蚜，用尼龙纱网与皮筋封口，置于25度，65％RH，光照14:10L:D的培养箱中饲养；
6)取新羽化的瓢虫成虫，将雌雄配对，分别饲喂处理和对照的桃蚜，置于25度，65％RH，光照14:10L:D的培养箱中饲养。
2.根据权利要求1所述的评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，其特征在于，步骤1)中，首先配制0.5mg/ml的新型Bt杀虫蛋白Cry 1Ah稀释液。
3.根据权利要求1所述的评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，其特征在于，步骤4)中，室温放置2h。
4.根据权利要求1所述的评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，其特征在于，每天检查幼虫存活情况与龄期变化情况；待幼虫化蛹后，记录化蛹日期和羽化日期，同时，羽化为成虫后，称重。
5.根据权利要求1所述的评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，其特征在于，连续观察20天雌雄成虫的寿命以及雌虫产卵量。

说明书全文

一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法

技术领域

[0001] 本发明属于转基因植物环境安全评价技术领域，涉及一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法。

背景技术

[0002] 转基因抗虫作物的种植，有效控制了其靶标害虫的发生危害，减少了广谱性化学杀虫剂的使用量，保护了害虫的天敌，但也带来一些潜在的影响，如靶标昆虫抗性进化和对农田非靶标生物的影响等。延缓靶标害虫抗性进化的策略之一是开发新型的Bt杀虫蛋白。因此，准确、及时的评价新型Bt杀虫蛋白对非靶标昆虫的影响，可为新型转基因作物的安全性评价奠定重要的基础。

[0003] 捕食性瓢虫属鞘翅目、瓢甲科，是许多作物生态系统中普遍存在的、资源丰富的天敌，其幼虫和成虫是多种害虫的天敌，包括蚜虫、粉虱、粉蚧、介壳虫和螨等。在田间条件下，即使在猎物非常充足的情况下，捕食性瓢虫经常会取食植物性的非猎物食物(如花粉和花蜜)来补充其食物组成。这使得他们能接触到转基因作物中表达的杀虫蛋白，从而可能受到一定的影响。

[0004] 多异瓢虫是新疆棉田一种重要的优势捕食性天敌，对蚜虫、叶螨、介壳虫等重要害虫具有很强的捕食能力，在新疆粮、棉、果、蔬等害虫综合治理中有着重要的地位。2018年，转Bt基因(Cry 1Ac)棉花在新疆已经允许大面积商业化推广种植，这会不会对多异瓢虫产生明显的负面影响尚未清楚。

[0005] 对于已经商业化的转基因棉花，通过用其花粉饲喂瓢虫可以来评价转入的Bt杀虫蛋白对瓢虫的影响。而对于众多的对靶标害虫控制效果较好的新型Bt杀虫蛋白，尚未转入作物中，无法采用饲喂花粉的方法评价其对瓢虫的安全性。因此，建立适用于评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，是准确评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的关键。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于填补现有技术中的空白，提供一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法。

[0007] 其具体技术方案为：

[0008] 一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法，包括以下步骤：

[0009] 1)首先配制0.4-0.6mg/ml的新型Bt杀虫蛋白(Cry 1Ah)稀释液；

[0010] 2)然后向其中加入有机硅表面活性剂，使其在稀释液中的浓度为0.1％；

[0011] 3)接着用喷壶将Bt蛋白稀释液喷在饲养桃蚜的豌豆苗上，尽量让桃蚜体表布满Bt蛋白稀释液；

[0012] 4)室温放置1.5-2.5h后，用上述处理过的桃蚜饲养瓢虫，以饲喂仅喷浓度为0.1％有机硅表面活性剂的桃蚜为对照；

[0013] 5)将初孵的瓢虫幼虫单头接入烧杯中，分别饲喂处理和对照的桃蚜，用尼龙纱网与皮筋封口，置于25度，65％RH，光照14:10(L:D)的培养箱中饲养；

[0014] 6)取新羽化的瓢虫成虫，将雌雄配对，分别饲喂处理和对照的桃蚜，置于25度，65％RH，光照14:10(L:D)的培养箱中饲养。

[0015] 进一步，步骤1)中，首先配制0.5mg/ml的新型Bt杀虫蛋白稀释液；

[0016] 进一步，步骤4)中，室温放置2h。

[0017] 进一步地，每天检查幼虫存活情况与龄期变化情况。待幼虫化蛹后，记录化蛹日期和羽化日期，同时，羽化为成虫后，称重。

[0018] 进一步地，连续观察20天雌雄成虫的寿命以及雌虫产卵量。

[0019] 与现有技术相比，本发明的有益效果：

[0020] 本发明提供的生物测定方法，适用范围广，对尚未转入作物中对靶标害虫有效的多种新型Bt杀虫蛋白均能够有效测定其对瓢虫的影响，具有很强的实用性。

具体实施方式

[0021] 下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

[0022] 实施例1

[0023] 本实施例提供一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫幼虫影响的生物测定方法。

[0024] 所述方法具体为：将初孵的多异瓢虫幼虫单头接入烧杯中，分别饲喂处理和对照的桃蚜，置于25度，65％RH，光照14:10(L:D)的培养箱中饲养，每天更换食物并检查幼虫存活情况与龄期变化情况。待幼虫化蛹后，记录化蛹日期和羽化日期，同时，羽化为成虫后，称重。处理和对照均重复3组，每组30头。试验结果详见表1。由表1可以看出，新型Bt杀虫蛋白处理的瓢虫幼虫存活率、幼虫历期、蛹历期及体重与对照间差异均不显著。这说明新型Bt杀虫蛋白对瓢虫幼虫的各项生命指标均没有不利影响。

[0025] 表1新型Bt杀虫蛋白对多异瓢虫幼虫生命指标的影响

[0026]

[0027] 实施例2

[0028] 本实施例提供一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫成虫影响的生物测定方法。

[0029] 所述方法具体为：取新羽化的多异瓢虫成虫，将雌雄配对，分别饲喂处理和对照的桃蚜，置于25度，65％RH，光照14:10(L:D)的培养箱中饲养，每天更换食物并连续观察20天雌雄成虫的寿命以及雌虫产卵量。处理和对照均重复3组，每组15对。试验结果详见表2。由表2结果可以看出，新型Bt杀虫蛋白处理的瓢虫雌雄成虫寿命与雌虫产卵量与对照间差异均不显著。这说明新型Bt杀虫蛋白对瓢虫成虫的各项生命指标也均没有不利影响。

[0030] 表2新型Bt杀虫蛋白对多异瓢虫成虫生命指标的影响

[0031]

[0032] 本发明提供的生物测定方法，适用范围广，对尚未转入作物中对靶标害虫有效的多种新型Bt杀虫蛋白均能够有效测定其对瓢虫的影响，具有很强的实用性。

[0033] 以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

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