一种昆虫病原线虫共生菌菌株及其应用
专利汇可以提供一种昆虫病原线虫共生菌菌株及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种昆虫病原 线虫 共生菌菌株，其特征在于，该 微 生物 的分类命名为嗜线虫沙雷氏菌的高毒 力 菌株R187?2，2016年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC M 2016240。本发明还公开了一种生物 杀虫剂 及其制备方法和应用。本发明提供的一种新型昆虫病原线虫共生菌杀虫菌剂，具有生产使用方便的优点，适用于现代生态农业经济中绿色无公害农产品的生产。本发明对于保护生态环境，提高农产品的附加值具有重要的意义。试验证明，R187?2菌株的液体菌剂及固体菌剂的杀虫效果良好，各组的死亡率都在85%以上。昆虫病原线虫共生菌菌株R187?2的杀虫谱广，有很大的市场开发潜力。，下面是一种昆虫病原线虫共生菌菌株及其应用专利的具体信息内容。
1.一种昆虫病原线虫共生菌菌株，其特征在于，该微生物的分类命名为嗜线虫沙雷氏菌(Serratia nematodiphila R187-2)的高毒力菌株R187-2，2016年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2016240。
2.权利要求1所述的昆虫病原线虫共生菌菌株在制备生物杀虫菌剂中的应用。
3.一种生物杀虫剂，其特征在于，其含有权利要求1所述的昆虫病原线虫共生菌菌株。
4.权利要求3所述的生物杀虫剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用接种针取R187-2菌种，在NBTA培养基上划线培养24小时；
2)挑取单菌落划线保存于LB培养基斜面试管；
3)将试管种接种于LB培养基的摇瓶中震荡培养至对数期；
4)取3)培养的菌种接种于种子罐的培养基中培养至对数期得到种子液；
5)将4)得到的种子液接入相同培养基的生产罐中培养；
6)在菌株接入种子罐和生产罐培养的过程中通入无菌空气发酵，生产罐发酵完成后培养液直接分装成液体剂型或者用泥炭吸附分装成固体剂型。
5.根据权利要求4所述的生物杀虫剂的制备方法，其特征在于，所述步骤4)和步骤5)中的培养基配方为葡萄糖0.6-0.8％、酵母膏0.03-0.3％、氯化钠0.2-0.4％、FeCl30.001％、pH值7.2～7.5。
6.根据权利要求4所述的生物杀虫剂的制备方法，其特征在于，所述步骤4)和步骤5)中的接种量为8-10％。
7.根据权利要求4所述的生物杀虫剂的制备方法，其特征在于，所述步骤6)中的通气量为1.0:0.6～1.0。
8.根据权利要求4所述的生物杀虫剂的制备方法，其特征在于，所述搅拌速度为180-
220rpm，培养温度为28-35℃，全流程培养时间为60～72h。
9.权利要求3所述的一种生物杀虫剂在昆虫病原线虫杀灭方面的应用。
一种昆虫病原线虫共生菌菌株及其应用
技术领域
背景技术
(Entomopathogenic nematodes，EPNs)因其侵染期幼虫消化道内携带有使寄主昆虫罹患败血症死亡的共生菌而得名。昆虫病原线虫及其共生菌是发展潜力巨大的一类环境友好型生物防治因子：1)高效，昆虫病原线虫侵入寄主血腔后在48h内杀死寄主；2)昆虫不易产生抗性，抗虫机制复杂，共生菌为已知基因组序列的细菌中含有杀虫毒素基因最多的一类细菌(Nature,2013,495:520-523；.Nature Biotechnology.2003,21:1307-1313；
Science.1998,280:2129-2132.)；3)环境友好型生态农药，对人畜、植物及有益生物安全，一些品系能显著提高昆虫Bt抗性的适合度代价、延缓靶标害虫对转Bt植物表达毒素的抗性(J Econ Entomol.2010,103:1821-1831)；4)抗逆性强，耐盐、可与化学农药混合施用，土壤农药残留不影响其施用(环境昆虫学报,2013,04:458-465；International journal for parasitology.2016,46:83-95；Nematology,2011 13:859-867；PNAS.2012,109:E2324-
33)；5)对土壤、钻蛀类和隐蔽性害虫的防治有特效，昆虫病原线虫通过嗅觉主动搜索寄主(PNAS.2012,109:E2324-33)。目前，昆虫病原线虫及其共生菌得到了非常广泛的开发和生物防治应用，在欧美国家可以豁免注册生产和释放，世界上该类杀虫剂的年销售额约为160亿美元，并每年以2～3％增长。在昆虫病原线虫-共生菌这类共生体中起主要杀虫作用的是存在于线虫肠道内与其共生的共生菌，共生菌被抑制或去除昆虫病原线虫就会完全或部分失去致病性(J Invertebr Pathol.2008,98:153-168；Journal of Applied
Entomology.2014,138(9):644-655；2013,495(7442):520-523)。
发明内容
具体实施方式
0.3％、氯化钠0.2-0.4％、FeCl3 0.001％、pH值7.2～7.5。投料完毕后121℃湿热高温灭菌
20-30分钟，冷却至30℃，取培养好的摇瓶中的菌种按8-10％的接种量接种500L种子罐培养至对数期。得到的种子液按8-10％的接种量接入相同培养基的生产罐中培养。在菌株接入种子罐和生产罐培养的过程中通入无菌空气，通气量为1:1，搅拌速度为180r.p.m.，培养温度为30℃，全流程培养时间为60h。生产罐发酵完成后培养液直接分装成液体剂型。
0.4％、FeCl3 0.001％、pH值7.2。投料完毕后121℃湿热高温灭菌30分钟，冷却至30℃，取培养好的摇瓶中的菌种按8％的接种量接种500L种子罐培养至对数期。得到的种子液按10％的接种量接入相同培养基的生产罐中培养。在菌株接入种子罐和生产罐培养的过程中通入无菌空气，通气量为1:0.6，搅拌速度为220r.p.m.，培养温度为28℃，全流程培养时间为
72h。生产罐发酵完成后培养液用泥炭吸附分装成固体剂型。
66h。生产罐发酵完成后培养液直接分装成液体剂型。
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