技术领域
[0001] 本
发明是属于药物制剂领域，具体的说，涉及一种原料中含有人参和附子的药物制剂及其制备方法和
质量控制方法。
背景技术
[0002] 古方“参附汤”，其方由人参、附子两味药组成。根据中医药理论，该方是回阳救逆、益气固脱之方，临床主要应用于阳气暴脱的厥脱症。
[0003] 人参中含有皂苷类、多糖类成分；附子中含有
生物碱类成分，主要是乌头类生物碱；酯型生物碱为乌头类生物碱中的一种，有毒。
[0004] 目前市场上有参附注射液销售，同时有多项有关参附注射液、参附注射用冻干粉针在中国
申请的已公开的
专利。但其都没有在制剂成品中保留人参中的多糖类成分作为一种主要的有效成分，如中国申请(专利)号为CN96117458.7、CN03135691.5、CN03135701.6、CN02149368.5、CN200510059785.0、CN200410013725.0、CN200510047701.1的已公开专利。
[0005] 人参中的多糖类成分具有多种活性，如人参中的多糖类成分可以从多种途径发挥抗
肿瘤的作用；人参中的多糖类成分对
机体的特异性免疫和非特异性免疫均有明显的促进作用；以及人参中的多糖类成分具有降血糖作用等多种生理活性。人参中的多糖类成分能提高休克病人的抵抗
力并对其恢复具有促进作用。
[0006] 更进一步的开发质量稳定、可控，有效成分种类保留更全、有效成分含量更高的参附的药物制剂，更加完整的保留和发扬传统古方的药效，能为临床使用提供更多更好的用药选择，也是更好的发展传统中药学的需要。
发明内容
[0007] 本
发明人在实验过程中意外的发现：对于人参和附子的药物制剂，在制剂成品中保留了人参中的多糖类成分的药物制剂的药理作用明显优于未保留人参中的多糖类成分的药物制剂。
[0008] 本发明人在前述发现的
基础上，经过大量的研究探索，结合新颖独特技术，研制出了一种原料中含有人参和附子的药物制剂。该药物制剂中含有人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分。
[0009] 本发明的一个目的是提供一种原料中含有人参和附子的药物制剂。
[0010] 在传统古方、验方的基础上，利用传统中医药理论、现代中医药理论和现代医药理论，通过在古方、验方上增减药味，改变药量配比，增加无配伍禁忌的、能起协同作用的中药、天然药物、中药提取物、天然药物提取物、中药有效部位、天然药物有效部位、中药有效化合物
单体、天然药物有效化合物单体、化学药物等药物，对古方、验方进行更进一步的深入研究和二次开发，是开发疗效更好，安全性更佳、研究开发成本更低的新药的一条捷径。
[0011] 本发明的药物制剂中的原料中含有人参、附子，同时在该药物制剂中可以不添加或添加一种或一种以上的无配伍禁忌的、能起协同作用的中药、天然药物、中药提取物、天然药物提取物、中药有效部位、天然药物有效部位、中药有效化合物单体、天然药物有效化合物单体、化学药物等药物，如甘草、黄芪、甘草提取物、黄芪提取物、
盐酸纳洛
酮、盐酸多巴胺等。
[0012] 该药物制剂中的人参和附子为野生品或人工栽培品，为道地药材或非道地药材。如所述的人参可为人参或山参或园参或林下参等。
[0013] 同时所述的人参和附子为其鲜药材或依传统方法炮制而成的炮制品或依现代方法炮制而成的炮制品。如所述的人参可为人参或生晒山参或生晒参或红参等，所述的附子可为黑顺片或白附片或盐附子等。
[0014] 本发明的一种原料中含有人参和附子的药物制剂可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括口服
固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。
[0015] 所述口服固体制剂可为片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、滴丸剂、固体分散剂、散剂、颗粒剂、微颗粒剂、微丸剂、微囊剂、微球剂、和其它药学上可接受的口服固体制剂。所述的口服液体制剂可为口服液和其它药学上可接受的口服液体制剂。所述的注射剂可为注射液、注射用
冻干制剂、注射用无菌分装制剂、
葡萄糖注射液、
氯化钠注射液和其它药学上可接受的注射剂。
[0016] 本发明的药物制剂，优选的是片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、固体分散剂、口服液、注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂、葡萄糖注射液、氯化钠注射液。更优选片剂、硬胶囊剂、固体分散剂、口服液、注射液、注射用冻干制剂。更优选为片剂、硬胶囊剂、口服液、注射液、注射用冻干制剂。
[0017] 本发明的药物制剂，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指单剂量制剂，如注射剂的每支，每瓶，口服制剂的每粒，每片等。
[0018] 本发明的药物制剂，原料中人参∶附子的比例为1-10∶1-10，优选1-4∶1-8，更优选1-2∶1-4，最优选1∶2。
[0019] 本发明的药物制剂，在每一单位剂量的制剂中，按原料计含有人参0.1g-25g，附子0.2g-50g；优选含有人参0.15g-20g，附子0.3g-40g；更优选含有人参0.2g-14g，附子0.4g-28g；更优选含有人参0.2g-11g，附子0.4g-22g。
[0020] 本发明的药物制剂，在每一单位剂量的制剂中，含有人参总皂苷1mg～90mg，人参总多糖2mg～282mg，附子总生物碱0.02mg～22mg。优选含有人参总皂苷2mg～60mg，人参总多糖4mg～188mg，附子总生物碱0.05mg～15mg。更优选含有人参总皂苷2.5mg～45mg，人参总多糖6mg～141mg，附子总生物碱0.06mg～11mg。
[0021] 具体的可为：在每一单位剂量的制剂中，含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计，为8mg～15mg；人参总多糖以葡萄糖计，为25mg～47mg；附子总生物碱
0.2mg～3.6mg。
[0022] 或在每一单位剂量的制剂中，含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计，为16mg～30mg；人参总多糖以葡萄糖计，为50mg～94mg；附子总生物碱0.4mg～7.2mg。
[0023] 或在每一单位剂量的制剂中，含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计，为40mg～75mg；人参总多糖以葡萄糖计，为125mg～235mg；附子总生物碱1mg～18mg。
[0024] 或在每一单位剂量的制剂中，含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计，为2.5mg～5mg；人参总多糖以葡萄糖计，为8mg～16mg；附子总生物碱0.06mg～1.2mg。
[0025] 附子中的酯型生物碱为乌头类生物碱中的一种，有毒。本发明的药物制剂，在每一单位剂量的制剂中，含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计，不得高于10.0mg，优选不得高于5.0mg，更优选不得高于3.0mg，更优选不得高于2.0mg，更优选不得高于1.0mg。
[0026] 本发明的药物制剂中含有量均分子量为30～36×104、8～12×104、3.5～4 4
7.5×10 的人参的多糖类成分中的一种或几种，其中量均分子量为33.0445×10、或
4 4
9.8878×10、或5.4087×10 的人参的多糖类成分的含量较高。
[0027] 本发明的药物制剂在必要时还含有或使用药物可接受的辅料(或载体)，所述辅料为药学上可接受的制剂辅助剂。
[0028] 本发明的药物制剂中优选含有0.05％～90％(重量百分比)的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分和附子的生物碱类成分，及99.95％～0％(重量百分比)的药学上可用的辅料。在所述制剂中人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分和附子的生物碱类成分的含量更优选为0.08％～80％，更优选0.1％～75％，更优选0.15％～70％。
[0029] 对于口服固体制剂和口服半固体制剂，所述辅料选自稀释剂、润湿剂、
粘合剂、崩解剂、助流剂、抗粘剂、
润滑剂、色、香、味及其调节剂、固体分散体载体材料、抗
氧化剂、
表面活性剂、稳定剂、PH调节剂和其它药学上可接受的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质。
[0030] 所述稀释剂是选自
淀粉、可压性淀粉、糖粉、糊精、乳糖、微晶
纤维素、甘露醇、山梨醇、
硫酸钙、
碳酸钙和其它药学上可接受的稀释剂中的一种或一种以上的物质；
[0031] 所述润湿剂是选自
乙醇、
水和其它药学上可接受的润湿剂中的一种或一种以上的物质；
[0032] 所述粘合剂是选自羟丙甲
纤维素、乙基纤维素、
羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙纤维素、淀粉浆、聚维酮、明胶、聚乙二醇、50％至70％
蔗糖溶液、海藻酸钠溶液和其它药学上可接受的粘合剂中的一种或一种以上的物质；
[0033] 所述崩解剂是选自羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、干淀粉、交联聚维酮、泡腾崩解剂和其它药学上可接受的崩解剂中的一种或一种以上的物质；
[0034] 所述助流剂、抗粘剂、润滑剂是选自滑石粉、微粉
硅胶、
硬脂酸镁、聚乙二醇类、月桂醇硫酸钠、月桂醇
硫酸镁、氢化
植物油和其它药学上可接受的助流剂、抗粘剂、润滑剂中的一种或一种以上的物质；
[0035] 所述色、香、味及其调节剂是选自药用色素、食用色素、香精和其它药学上可接受的色、香、味及其调节剂中的一种或一种以上的物质；
[0036] 所述的固体分散体载体材料是选自聚乙二醇类、纤维素衍生物、
有机酸类、表面活性剂类、聚维酮类、糖类与醇类、纤维素类、聚
丙烯酸树脂类、β-谷甾醇、胆固醇、胆固醇硬脂酸酯、棕榈酸甘油酯、氢化
蓖麻油、蓖麻油蜡、蜂蜡、巴西棕榈蜡和其它药学上可接受的固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质，每类固体分散体载体材料可不选或选用该类固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质；
[0037] 所述的pH调节剂可以是至少一种药学上可接受的用于调节pH值的物质，所述调节pH值的物质是选自碱性化合物、缓冲系统、酸和其它药学上可接受的用于调节pH值的物质中的一种或一种以上的物质。
[0038] 对于口服液体制剂，所述辅料选自
溶剂、增溶剂、助溶剂、潜溶剂、
防腐剂、矫味剂、
着色剂、pH调节剂、抗氧剂、
金属离子络合剂和其它药学上可接受的液体制剂附加剂中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质。
[0039] 所述的溶剂是选自水、一定浓度的乙醇、甘油、丙二醇和其它药学上可接受的液体制剂用溶剂中的一种或一种以上的物质；
[0040] 所述的防腐剂是选自对羟基苯
甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等对羟基
苯甲酸酯类、山梨酸及其盐、苯甲酸及其盐、薄荷油和其它药学上可接受的液体制剂用防腐剂中的一种或一种以上的物质；
[0041] 所述的矫味剂是选自蔗糖、单糖浆、果汁糖浆、山梨醇、甘油、甘露醇、糖精钠、薄荷挥发油和其它药学上可接受的液体制剂用矫味剂中的一种或一种以上的物质。
[0042] 对于注射剂，所述辅料选自药学上可接受的注射用溶剂、增溶剂、
抑菌剂、抗氧剂、稳定剂、络合剂、
镇痛剂、等渗调节剂、缓冲剂、pH调节剂，以及药学上可接受的具有其它辅助功能的药物中的一种或一种以上的物质，每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质。
[0043] 所述的注射用溶剂是选自注射用水、一定浓度的乙醇、甘油、丙二醇、苯甲醇和其它药学上可接受的注射用溶剂中的一种或一种以上的物质；
[0044] 所述的增溶剂是选自聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚山梨酯40、聚山梨酯60和其它药学上可接受的注射剂用增溶剂中的一种或一种以上的物质；
[0045] 所述的抑菌剂是选自羟丙丁酯、羟丙甲酯、苯甲醇、
苯酚、三氯叔丁醇和其它药学上可接受的注射剂用抑菌剂中的一种或一种以上的物质；
[0046] 所述的抗氧剂是选自焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、
硫代硫酸钠和其它药学上可接受的注射剂用抗氧剂中的一种或一种以上的物质；
[0047] 所述的络合剂是选自乙二胺四
醋酸二钠、环己二胺四醋酸钠、N-羟基二乙胺三醋酸、二乙基三胺六醋酸和其它药学上可接受的络合剂中的一种或一种以上的物质。
[0048] 所述的pH调节剂是选自一定浓度的氢氧化钠溶液、一定浓度的盐
酸溶液、
磷酸、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液、
磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液和其它药学上可接受的pH调节剂中的一种或一种以上的物质。
[0049] 其中所述的注射用冻干制剂还可以在制剂中不加入或加入了一种或一种以上的药物可接受的适量的赋形剂。所述赋形剂选自甘露醇、山梨醇、甘
氨酸、乳糖、氯化钠、葡萄糖和其它药学上可接受的赋形剂中的一种或一种以上的物质。所述的赋形剂优选甘露醇、山梨醇。
[0050] 本发明的药物制剂在使用时根据患者具体情况确定用法用量，可每日使用1～4次，每次使用1～20单位剂量的药物制剂，如每次使用1～20片或粒或支。
[0051] 本发明另一目的是提供一种原料中含人参和附子的药物制剂的制备方法。
[0052] 本发明的药物制剂的制备方法如下：
[0053]
处方：人参、附子、起协同作用的药物(添加或不添加)、辅料(添加或不添加)[0054] 制备方法简述：提取人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分，添加或不添加起协同作用的药物，添加或不添加辅料，制成一种原料中含有人参和附子的口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。
[0055] 制备方法
[0056] 一、人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分的提取：
[0057] (1)人参的处理：人参采用一定浓度的乙醇提取(提取方法采用回流提取法或超声提取法或渗漉法或浸渍法或连续提取法或减压提取法)，所得提取液滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药0.5～4.5g，用水饱和的正丁醇萃取，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参的皂苷类成分中间体，备用；
[0058] (2)人参药渣的处理：人参被一定浓度的乙醇提取后的药渣先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超声提取法或渗漉法或浸渍法或连续提取法或减压提取法)，所得提取液滤过，调整药液浓度为0.2～2.4g生药/ml，
温度为20～70℃，加入85～95％的乙醇醇沉使含醇量达到70～90％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液(或不离心，滤过后直接调整药液浓度)，调整上清液药液浓度为0.7～6g生药/ml，加入85～95％的乙醇使含醇量达60～80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液(或不离心，滤过后直接取滤液)，
[0059] 上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；
[0060] 上一步所得上清液采用截留分子量100K～900K的
超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0061] 或将上一步所得上清液先用截留分子量100K～900K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量1K～10K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0062] (3)附子的处理：附子药材先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超声提取法或渗漉法或浸渍法或连续提取法或减压提取法)，所得提取液滤过，调整药液的相对
密度为1.0～1.25，温度20～65℃，用85～95％的乙醇醇沉使乙醇含量达60～80％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.05～1.45时加入85～95％的乙醇使醇含量达75～90％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；
[0063] 滤液加热至沸，保持微沸10～60分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0064] 或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.7～2.5g，每次加入0.5～3倍量的二氯甲烷萃取2～9次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0065] 二、起协同作用的药物的处理：
[0066] (4)起协同作用的药物的处理：起协同作用的药物是中药或天然药物的，提取其有效部位或有效成分单体，(精制)，水溶，调节pH值至5.5～8.5，滤过，即得中间体，备用；起协同作用的药物是化学药物的，水溶，pH值调至5.5～8.5，滤过，即得中间体，备用；(备注：用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可以不水溶)
[0067] 三、各药物制剂成品的制备：
[0068] (5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体，混匀；
[0069] (6)将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体合并，混匀，所得药液滤过，浓缩成清膏[或将“(5)”所得药液滤过，浓缩成清膏，与“(4)”未水溶的中间体混合]，加入适量的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料混匀，制软材，制粒，烘干，压片或装入胶囊，制成一种原料中含有人参和附子的片或胶囊。
[0070] (7)将“(5)”所得药液用纯化水或注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1～2.0g生药/ml，调节pH值至5.5～8.5，加热至沸，保持微沸20～60分钟，冷却，冷藏过夜；
滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料，或滤液加入适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料；混匀，(滤过)]，调节pH值至5.5～8.5，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至口服液
包装容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参和附子的口服液。
[0071] (8)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1～2.0g生药/ml，调节pH值至5.5～8.5，加热至沸，保持微沸20～60分钟，冷却，冷藏过夜；滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料，或滤液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料；混匀，(滤过)]，(调节pH值至5.5～8.5)，加入0.02～0.5％
活性炭加热至沸，保持微沸10～60分钟，滤过，调节pH值至5.5～8.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，按剂量分装至注射液包装用容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参和附子的注射液。(9)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.3～2.0g生药/ml，调节pH值至5.5～8.5，加热至沸，保持微沸20～60分钟，冷却，冷藏过夜；滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料，或滤液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料；混匀，(滤过)]，调节pH值至5.5～8.5，加入0.02～0.5％活性炭加热至沸，保持微沸10～60分钟，滤过，调节pH值至5.5～8.5，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1～8ml药液，
冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂。
[0072] (10)冷冻干燥工艺如下：
[0073] a预冻阶段：普通预冻，预冻温度-60℃～-40℃，预冻时间约2.5～6小时；或选择反复预冻，预冻温度-60℃～-40℃，回温温度-15℃～-7℃，预冻时间约3～9小时。
[0074] b
升华干燥阶段：当
冷凝器的温度降至-60℃～-45℃以下，开启
真空泵，将
搁板的温度设置在-30℃～-15℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。
[0075] c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至-5℃～30℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。
[0076] 优选的制备方法
[0077] 本发明的药物制剂优选的制备方法为：
[0078] 一、人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分的提取：
[0079] (1)人参的处理：人参分别加3～9倍量(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)60～80％乙醇回流提取或超声提取1～4次，每次0.5～3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药0.75～3.0g，每次加入0.7～3倍量的水饱和的正丁醇萃取2～9次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参的皂苷类成分中间体，备用；
[0080] (2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加6～13.5倍量水(第一次因为是干药材，多加1～5倍量)煎煮提取或回流提取2～6次，每次0.5～4小时，合并提取液，滤过，调整药液浓度为0.4～1.6g生药/ml，温度为20～60℃，加入90～95％的乙醇醇沉使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液(或不离心，滤过后直接调整药液浓度，用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备)，调整上清液药液浓度为1.0～4.0g生药/ml，加入90～95％的乙醇使含醇量达65～75％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液(或不离心，滤过后直接取滤液，用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备)，
[0081] 上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；
[0082] 上一步所得上清液采用截留分子量100K～700K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0083] 或将上一步所得上清液先用截留分子量100K～700K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量1K～8K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0084] (3)附子的处理：附子药材加4～12倍量水(第一次因为是干药材，多加1～4倍量)，煎煮提取或回流提取2～6次，每次0.5～3小时，合并提取液，滤过，调整药液的相对密度为1.01～1.21，温度20～60℃，用90～95％的乙醇醇沉使乙醇含量达65～75％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.15～1.40时加入90～95％的乙醇使醇含量达80～90％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；
[0085] 滤液加热至沸，保持微沸15～55分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0086] 或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.8～2.0g，每次加入0.8～2倍量的二氯甲烷萃取3～7次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0087] 二、起协同作用的药物的处理：
[0088] (4)起协同作用的药物的处理：起协同作用的药物是中药或天然药物的，提取其有效部位或有效成分单体，(精制)，水溶，调节pH值至6～8，滤过，即得中间体，备用；起协同作用的药物是化学药物的，水溶，pH值调至6～8，滤过，即得中间体，备用；(备注：用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可以不水溶)
[0089] 三、各药物制剂成品的制备：
[0090] (5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体，混匀；
[0091] (6)将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体合并，混匀，所得药液滤过，浓缩成清膏[或将“(5)”所得药液滤过，浓缩成清膏，与“(4)”未水溶的中间体混合]，加入适量的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料混匀，制软材，制粒，烘干，压片或装入胶囊，制成一种原料中含有人参和附子的片或胶囊。
[0092] (7)将“(5)”所得药液用纯化水或注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1～1.5g生药/ml，调节pH值至6.0～8.0，加热至沸，保持微沸20～60分钟，冷却，冷藏过夜；
滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料，或滤液加入适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料；混匀，(滤过)]，调节pH值至6.0～8.0，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至口服液包装容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参和附子的口服液。
[0093] (8)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1～1.5g生药/ml，调节pH值至6.0～8.0，加热至沸，保持微沸20～60分钟，冷却，冷藏过夜；滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料，或滤液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料；混匀，(滤过)]，(调节pH值至6.0～8.0)，加入0.02～0.3％活性炭加热至沸，保持微沸10～40分钟，滤过，调节pH值至6.0～8.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，按剂量分装至注射液包装用容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参和附子的注射液。
[0094] (9)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.5～2.0g生药/ml，调节pH值至6.0～8.0，加热至沸，保持微沸20～60分钟，冷却，冷藏过夜；滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料，或滤液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料；混匀，(滤过)]，调节pH值至6.0～8.0，加入0.02～0.3％活性炭加热至沸，保持微沸10～40分钟，滤过，调节pH值至6.0～8.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，精滤(过0.22～0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器)，无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1～6ml药液，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂。
[0095] (10)冷冻干燥工艺如下：
[0096] a预冻阶段：普通预冻，预冻温度-60℃～-45℃，预冻时间约2.5～6小时；或选择反复预冻，预冻温度-60℃～-45℃，回温温度-13℃～-8℃，预冻时间约3～9小时。
[0097] b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-60℃～-45℃以下，开启
真空泵，将搁板的温度设置在-26℃～-15℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。
[0098] c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～25℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间3～12小时。
[0099] 本发明的药物制剂的制备方法中的“人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分的提取”的方法可以更优选为：
[0100] (1)人参的处理：人参分别加5～7倍量(第一次因为是干药材，多加1～2倍量)65～75％乙醇回流提取2～3次，每次1.5～2.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.0～2.0g，每次加入0.8～1.2倍量的水饱和的正丁醇萃取5～7次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参的皂苷类成分中间体，备用；
[0101] (2)人参药渣的处理：醇提后的人参药渣分别加8～10倍量水(第一次因为是干药材，多加2～4倍量)煎煮提取或回流提取2～4次，每次1.5～2.5小时，合并提取液，滤过，调整药液浓度为0.6～1.0g生药/ml，温度为20～45℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到75～85％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液(或不离心，滤过后直接调整药液浓度，用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备)，调整上清液药液浓度为1.5～2.5g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达65～75％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液(或不离心，滤过后直接取滤液，用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备)，
[0102] 上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；
[0103] 上一步所得上清液采用截留分子量100K～600K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0104] 或将上一步所得上清液先用截留分子量100K～600K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量1K～8K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0105] (3)附子的处理：附子药材加7～9倍量水(第一次因为是干药材，多加1～3倍量)，煎煮提取或回流提取2～4次，每次0.5～1.5小时，合并提取液，滤过，调整药液的相对密度为1.05～1.16，温度40～55℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量达65～75％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.21～1.35时加入95％的乙醇使醇含量达80～90％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备；
[0106] 滤液加热至沸，保持微沸30～45分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备；
[0107] 或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.8～1.2g，每次加入0.8-1.2倍量的二氯甲烷萃取4～6次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用，可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备。
[0108] 本发明的再一个目的是提供一种原料中含有人参和附子的药物制剂的质量控制方法。使本发明的药物制剂的质量稳定可控。
[0109] 本发明优选的提供一种原料中含有人参和附子的注射剂的质量控制方法，包括下述的
鉴别、检查、含量测定、指纹图谱。
[0110] 所述的鉴别、检查、含量测定、指纹图谱及其中的单个的具体方法可分别选用或任意组合使用，用于一种原料中含有人参和附子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制。
[0111] 所述的鉴别、检查、含量测定、指纹图谱包括人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的鉴别、附子的鉴别，乌头类生物碱的限量检查，人参皂苷Rg1和Re的含量测定、人参总皂苷的含量测定、人参中的多糖类成分的含量测定，人参药材指纹图谱、附子药材指纹图谱、制剂中的人参皂苷的指纹图谱和生物碱的指纹图谱。
[0112] 所述的一种原料中含有人参和附子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法如下：
[0113] [1]鉴别
[0114] [1.1]人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的鉴别：
[0115] 取制备好的注射剂内容物1.0g，加水30ml溶解，加氯仿30～50ml，振摇，取水液蒸干，残渣加水2ml使溶解，加入水饱和的正丁醇8～12ml超声处理25～40分钟，取正丁醇液置分液漏斗中，加入2～4倍量的氨试液，洗涤，洗液弃去，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参药材1g(过60目筛)，加乙醇20～40ml，加热回流20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液同法制成人参药材溶液。再分别取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各2.5～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(14～16∶38～42∶21～23∶9～11)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与人参药材色谱相应的
位置上，显相同
颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0116] [1.2]附子的鉴别：
[0117] 取制备好的注射剂内容物3.5g，加水30ml溶解，用氨试液调节pH值至9～11，加乙醚振摇提取2～4次，每次40～50ml，醚液低温蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，做为供试品溶液。另取附子药材粗粉20g，置具塞锥形瓶中，加乙醚130～170ml，振摇9～12分钟，加氨试液9～11ml，振摇25～35分钟，放置1～2小时，分取醚层，挥干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为附子药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各12～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板(厚500μm)上，层析缸先以
氨水饱和，以石油醚-乙醚-丙酮(4.8～5.2∶2.8～3.2∶2.8～3.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋
钾试液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与附子药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0118] [2]检查
[0119] [2.1]乌头类生物碱的限量检查：
[0120] [2.1.1]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的乌头碱对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0121] [2.1.2]标准曲线的制备精密量取上述对照品溶液0.2～0.3ml、0.4～0.6ml、0.65～0.85ml、0.9～1.1ml、1.4～1.6ml、1.65～1.85ml、1.9～2.1ml，分别置分液漏斗中，分别加入0.01mol/L盐酸溶液1.85～1.65ml、1.6～1.4ml、1.35～1.15ml、1.1～
0.9ml、0.6～0.4ml、0.35～0.15ml、0.00ml，分别精密加入醋酸-醋酸钠缓冲液(取
0.2mol/L醋酸溶液250ml，用0.2mol/L醋酸钠溶液调pH值至3.1)8～12ml，溴甲酚绿液(取溴甲酚绿50mg，加0.05mol/L氢氧化钠溶液1.6ml
研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿振摇提取3次，每次30ml，弃去氯仿液)1.5～2.5ml，氯仿8～12ml，振摇2～6分钟，静置，分取氯仿液，随行空白，照分光光度度法(中国药典2005年版一部附录VA)在415nm
波长处测定吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
[0122] [2.1.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，加水10ml溶解，转移至分液漏斗中，加氨试液调节pH值至10～11，用等量的氯仿振摇提取3～5次，合并氯仿液，蒸干。残渣加0.01mol/L盐酸溶液分次溶解，并转入10ml量瓶中，稀释至刻度摇匀，即得。
[0123] [2.1.4]测定法精密量取上述供试品溶液2ml，分别置分液漏斗中，照“标准曲线的制备”项下自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定吸光度，计算，即得。
[0124] [2.1.5]制备好的注射剂每支含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计，不得高于1.0mg。
[0125] [3]含量测定
[0126] [3.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定：
[0127] 照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
[0128] [3.1.1]色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸溶液(17～23∶75～85)为流动相，检测波长203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于5000。
[0129] [3.1.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rg1及人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液，即得。
[0130] [3.1.3]供试品溶液的制备取装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，置5ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0131] [3.1.4]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10～30μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0132] [3.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量之和应为0.2～2.0mg。
[0133] [3.2]人参总皂苷的含量测定：
[0134] [3.2.1]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb10.3mg的溶液，即得。
[0135] [3.2.2]标准曲线的制备精密量取上述人参皂苷Rb1对照品溶液0.05～0.15ml，0.15～0.25ml，0.25～0.35ml，0.35～0.45ml，0.45～0.55ml，0.55～0.65ml，0.65～
0.75ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，各加入5％香草
醛-
冰醋酸溶液(新鲜配制)0.15～
0.25ml及高氯酸0.6～1.0ml，于55～65℃水浴上加热12～18min，取出，迅速冷却，加冰醋酸3～7ml，摇匀，同时以相应的
试剂作为空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)于556nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。
[0136] [3.2.3]样品溶液的制备取装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，加蒸馏水10ml溶解，置分液漏斗中，用氯仿振摇提取3～5次，每次8～12ml，弃去氯仿液，水液再以水饱和的正丁醇振摇提取3～5次，每次8～12ml，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤2～3次，每次8～12ml，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0137] [3.2.4]测定法精密量取样品溶液0.1ml置具塞试管中，照“标准曲线制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度，计算，即得。
[0138] [3.2.5]制备好的注射剂每支含人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计，应为2.0～20.0mg。
[0139] [3.3]人参中多糖类成分的含量测定
[0140] [3.3.1]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，精密称定，加蒸馏水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液，即得。
[0141] [3.3.2]标准曲线的制备精密量取葡萄糖对照品溶液0.05～0.15ml，0.15～0.25ml，0.25～0.35ml，0.35～0.45ml，0.45～0.55ml，0.55～0.65ml，0.65～0.75ml，
0.75～0.85ml，分别置具塞试管中，分别加水使成1.0ml，各精密加入新鲜配制的0.2％蒽酮硫酸(硫酸浓度为80％)溶液6～10ml，摇匀，在100℃水浴中加热8～12分钟，迅速冷却后，随行空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)在620nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
[0142] [3.3.3]样品溶液的制备取装量差异项下的制备好的注射剂内容物3.5g，精密称定，加水25～35ml溶解后，加入乙醇使含醇量达75～85％，离心，沉淀挥干乙醇后加入蒸馏水溶解，并定容至100ml量瓶中。取上述溶液1～3ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
[0143] [3.3.4]测定法精密量取0.2ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水至1.0ml”起依法测定吸光度，计算，即得。
[0144] [3.3.5]制备好的注射剂每支含人参中的多糖类成分以葡萄糖计，应为4～60mg。
[0145] [4]指纹图谱
[0146] 参照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定
[0147] [4.1]人参药材指纹图谱
[0148] [4.1.1]药材名称和来源
[0149] 本人参药材指纹图谱中的人参选用红参，红参为五加科植物人参Panaxginseng C.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎。
[0150] [4.1.2]人参药材指纹图谱的测定
[0151] [4.1.2.1]色谱条件色谱柱：ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水为流动相，梯度条件见下表
[0152] 梯度条件
[0153]
[0154] 柱温：25～35℃；分析时间：60～120min；流速：0.6～1.0ml/min；ELSD漂移管100～120℃，载气流速2.0～4.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计应不低于5000。
[0155] [4.1.2.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0156] [4.1.2.3]供试品溶液的制备取红参药材粉末(过20目筛)2g，精密称定，加70％乙醇回流提取2次，每次0.8～1.5小时，第一次加6～8倍量，第二次加5～7倍量；提取液滤过，滤液回收乙醇，浓缩，用等量水饱和的正丁醇振摇提取4～6次，合并正丁醇液，并用等量的氨试液洗涤；洗涤液弃去，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解并转移至10ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。
[0157] [4.1.2.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0158] [4.1.2.5]结果将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算，共标定出10个共有峰，其相对保留时间分别为：0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10 ％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％；并规定相对保留时间为
0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)为0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。
[0159] [4.2]附子药材指纹图谱
[0160] [4.2.1]附子药材的名称和来源
[0161] 附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。本附子药材指纹图谱中的附子选用黑顺片。
[0162] [4.2.2]附子药材指纹图谱的测定
[0163] [4.2.2.1]色谱条件：色谱柱：ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)，填料粒径5μm；流动相：甲醇与0.1％磷酸-0.04％三乙胺-水溶液为流动相，梯度条件见下表
[0164] 梯度条件
[0165]
[0166] 柱温：25～35℃；检测波长：235nm；分析时间：60～120min；流速：0.7～1.3ml/min；理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000。
[0167] [4.2.2.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0168] [4.2.2.3]供试品溶液的制备附子药材粗粉10g，用氨试液3～5ml、乙醚40～60ml冷浸过夜，滤过；药渣加乙醚∶氯仿(2.8～3.2∶0.8～1.2)混合溶液40～60ml，超声处理25～40min，滤过，药渣用混合溶液洗涤3～4次，每次14～16ml，洗液与滤液合并，低温蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，用0.45μm的滤膜滤过，即可进行测定。
[0169] [4.2.2.4]测定法分别精密吸取内标溶液15～25μl和供试品溶液30～50μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0170] [4.2.2.5]结果将新乌头碱峰设定为参照物峰，根据新乌头碱峰的保留时间计算，共标定出8个共有峰，其相对保留时间分别为：0.146±10％、0.254±10％、0.531±10％、0.630±10％、0.727±10％、0.833±10％、1.000、1.114±10％；并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为0.531±10％的峰之峰面积作为1.000，并规定相对保留时间为
0.727±10％、1.114±10％的峰的相对峰面积比为0.182～0.272、0.373～0.552。
[0171] [4.3]人参皂苷指纹图谱
[0172] [4.3.1]色谱条件色谱柱：ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；乙腈与水为流动相，梯度条件见下表：
[0173] 梯度条件
[0174]
[0175] 柱温：25～35℃；分析时间：60～120min；流速：0.6～1.0ml/min；ELSD参数：漂移管100～120℃，载气流速2.0～4.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计算应不低于5000。
[0176] [4.3.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0177] [4.3.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，加水溶解至8～12ml，用等量的水饱和正丁醇振摇提取4～6次，合并正丁醇液，用等量的氨试液洗涤1～2次，分取正丁醇液，回收正丁醇，残渣用蒸馏水溶解并定容至5ml量瓶中，摇匀，即得。
[0178] [4.3.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0179] [4.3.5]结果将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算，共标定出10个共有峰，其相对保留时间分别为：0.441±10％、0.632±10％、0.942±10％、1.000、1.042±10％、1.062±10％、
1.089±10％、1.188±10％、1.701±10％、1.737±10％；并规定相对保留时间为
0.441±10％、0.632±10％、1.042±10％、1.089±10％的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)分别为0.688～1.148、0.673～1.121、0.692～1.154、0.688～1.146。
[0180] [4.4]生物碱指纹图谱
[0181] [4.4.1]色谱条件色谱柱：ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒径5μm；甲醇与0.1％磷酸-0.04％三乙胺水溶液为流动相，梯度条件见下表：
[0182] 梯度条件
[0183]
[0184] 柱温25～35℃；检测波长：235nm；分析时间：60～120min；理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000。
[0185] [4.4.2]内标溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加1％磷酸溶液3ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0186] [4.4.3]供试品溶液的制备精密量取制备好的注射剂内容物1.0g，加水溶解至8～12ml，置分液漏斗中，加氨试液调pH值至9～11，用等量的乙醚-氯仿(2.8～3.2∶0.8～1.2)的
混合液振摇提取4～6次，合并萃取液，低温挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，加入内标溶液40～60μl，滤过，作为供试品溶液。
[0187] [4.4.4]测定法分别精密吸取内标溶液15～25μl和供试品溶液30～50μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0188] [4.4.5]结果将新乌头碱峰设定为相对保留时间的参照物峰，根据新乌头碱峰的保留时间计算，共标定出5个共有峰，其相对保留时间分别为：0.259±10％、0.342±10％、0.532±10％、0.724±10％、1.000±10％；并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为
0.532±10％的峰之峰面积作为1.000，并规定相对保留时间为0.724±10％的峰的相对峰面积比为0.455～0.683。
[0189] 所述的一种原料中含有人参和附子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法，其各具体步骤如下：
[0190] [1]鉴别
[0191] [1.1]人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的鉴别：
[0192] 取制备好的注射剂内容物1.0g，加水30ml溶解，加氯仿40ml，振摇，取水液蒸干，残渣加水2ml使溶解，加入水饱和的正丁醇10ml超声处理30分钟，取正丁醇液置分液漏斗中，加入3倍量的氨试液，洗涤，洗液弃去，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参药材1g(过60目筛)，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液同法制成人参药材溶液。再分别取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各2.5～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与人参药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0193] [1.2]附子的鉴别：
[0194] 取制备好的注射剂内容物3.5g，加水30ml溶解，用氨试液调节pH值至10，加乙醚振摇提取3次，每次45ml，醚液低温蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，做为供试品溶液。另取附子药材粗粉20g，置具塞锥形瓶中，加乙醚150ml，振摇10分钟，加氨试液10ml，振摇30分钟，放置1～2小时，分取醚层，挥干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为附子药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各12～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板(厚500μm)上，层析缸先以氨水饱和，以石油醚-乙醚-丙酮(5∶3∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与附子药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0195] [2]检查
[0196] [2.1]乌头类生物碱的限量检查：
[0197] [2.1.1]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的乌头碱对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0198] [2.1.2]标准曲线的制备精密量取上述对照品溶液0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.00ml、1.50ml、1.75ml、2.00ml，分别置分液漏斗中，分别加入0.01mol/L盐酸溶液
1.75ml、1.50ml、1.25ml、1.00ml、0.50ml、0.25ml、0.00ml，分别精密加入醋酸-醋酸钠缓冲液(取0.2mol/L醋酸溶液250ml，用0.2mol/L醋酸钠溶液调pH值至3.1)10ml，溴甲酚绿液(取溴甲酚绿50mg，加0.05mol/L氢氧化钠溶液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿振摇提取3次，每次30ml，弃去氯仿液)2ml，氯仿10ml，振摇3分钟，静置，分取氯仿液，随行空白，照分光光度度法(中国药典2005年版一部附录VA)415nm波长处测定吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
[0199] [2.1.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，加水10ml溶解，转移至分液漏斗中，加氨试液调节pH值至10～11，用等量的氯仿振摇提取4次，合并氯仿液，蒸干。残渣加0.01mol/L盐酸溶液分次溶解，并转入10ml量瓶中，稀释至刻度摇匀，即得。
[0200] [2.1.4]测定法精密量取上述供试品溶液2ml，分别置分液漏斗中，照“标准曲线的制备”项下自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定吸光度，计算，即得。
[0201] [2.1.5]制备好的注射剂每支含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计，不得高于1.0mg。
[0202] [3]含量测定
[0203] [3.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定：
[0204] 照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
[0205] [3.1.1]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)为流动相，检测波长203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于5000。
[0206] [3.1.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rg1及人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液，即得。
[0207] [3.1.3]供试品溶液的制备取装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，置5ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0208] [3.1.4]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0209] [3.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量之和应为0.8～1.4mg。
[0210] [3.2]人参总皂苷的含量测定：
[0211] [3.2.1]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb10.3mg的溶液，即得。
[0212] [3.2.2]标准曲线的制备精密量取上述人参皂苷Rb1对照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，各加入5％香草醛-冰醋酸溶液(新鲜配制)0.2ml及高氯酸0.8ml，于60℃水浴上加热15min，取出，迅速冷却，加冰醋酸5ml，摇匀，同时以相应的试剂作为空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)于556nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，取样量为横坐标，绘制标准曲线。
[0213] [3.2.3]样品溶液的制备取装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，加蒸馏水10ml溶解，置分液漏斗中，用氯仿振摇提取4次，每次10ml，弃去氯仿液，水液再以水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0214] [3.2.4]测定法精密量取样品溶液0.1ml置具塞试管中，照“标准曲线制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度，计算，即得。
[0215] [3.2.5]制备好的注射剂每支含人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计，应为8.0～15.0mg。
[0216] [3.3]人参中多糖类成分的含量测定
[0217] [3.3.1]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，精密称定，加蒸馏水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液，即得。
[0218] [3.3.2]标准曲线的制备精密量取葡萄糖对照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，0.8ml，分别置具塞试管中，分别加水使成1.0ml，各精密加入新鲜配制的0.2％蒽酮硫酸(硫酸浓度为80％)溶液8ml，摇匀，在100℃水浴中加热10分钟，迅速冷却后，随行空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)在620nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
[0219] [3.3.3]样品溶液的制备取装量差异项下的制备好的注射剂内容物3.5g，精密称定，加水30ml溶解后，加入乙醇使含醇量达80％，离心，沉淀挥干乙醇后加入蒸馏水溶解，并定容至100ml量瓶中。取上述溶液2ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
[0220] [3.3.4]测定法精密量取0.2ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水至1.0ml”起依法测定吸光度，计算，即得。
[0221] [3.3.5]制备好的注射剂每支含人参中的多糖类成分以葡萄糖计，应为27～47mg。
[0222] [4]指纹图谱
[0223] 参照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定
[0224] [4.1]人参药材指纹图谱
[0225] [4.1.1]药材名称和来源
[0226] 本人参药材指纹图谱中的人参选用红参，红参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎。
[0227] [4.1.2]人参药材指纹图谱的测定
[0228] [4.1.2.1]色谱条件色谱柱：ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；流动相：乙腈与水为流动相，梯度条件见下表
[0229] 梯度条件
[0230]
[0231] 柱温：30℃；分析时间：60min；流速：0.8ml/min；ELSD漂移管110℃，载气流速3.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计应不低于5000。
[0232] [4.1.2.2]对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0233] [4.1.2.3]供试品溶液的制备取红参药材粉末(过20目筛)2g，精密称定，加70％乙醇回流提取两次，每次1小时，第一次加7倍量，第二次加6倍量；提取液滤过，滤液回收乙醇，浓缩，用等量水饱和的正丁醇振摇提取5次，合并正丁醇液，并用等量的氨试液洗涤；洗涤液弃去，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解并转移至10ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。
[0234] [4.1.2.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0235] [4.1.2.5]结果将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算，共标定出10个共有峰，其相对保留时间分别为：0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10 ％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％；并规定相对保留时间为
0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)为0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。
[0236] [4.2]附子药材指纹图谱
[0237] [4.2.1]附子药材的名称和来源
[0238] 附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。本附子药材指纹图谱中的附子选用黑顺片。
[0239] [4.2.2]附子药材指纹图谱的测定
[0240] [4.2.2.1]色谱条件：色谱柱：ZORBAX SBC18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒径5μm；流动相：甲醇与0.1％磷酸-0.04％三乙胺-水溶液为流动相，梯度条件见下表
[0241] 梯度条件
[0242]
[0243] 柱温：30℃；检测波长：235nm；分析时间：60min；流速：1.0ml/min；理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000。
[0244] [4.2.2.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0245] [4.2.2.3]供试品溶液的制备附子药材粗粉10g，用氨试液4ml、乙醚50ml冷浸过夜，滤过；药渣加乙醚∶氯仿(3∶1)混合溶液50ml，超声处理30min，滤过，药渣用混合溶液洗涤3～4次，每次15ml，洗液与滤液合并，低温蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，用0.45μm的滤膜滤过，即可进行测定。
[0246] [4.2.2.4]测定法分别精密吸取内标溶液20μl和供试品溶液40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0247] [4.2.2.5]结果将新乌头碱峰设定为参照物峰，根据新乌头碱峰的保留时间计算，共标定出8个共有峰，其相对保留时间分别为：0.146±10％、0.254±10％、0.531±10％、0.630±10％、0.727±10％、0.833±10％、1.000、1.114±10％；并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为0.531±10％的峰之峰面积作为1.000，并规定相对保留时间为
0.727±10％、1.114±10％的峰的相对峰面积比为0.182～0.272、0.373～0.552。
[0248] [4.3]人参皂苷指纹图谱
[0249] [4.3.1]色谱条件色谱柱：ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒径5μm；乙腈与水为流动相，梯度条件见下表：
[0250] 梯度条件
[0251]
[0252] 柱温：30℃；分析时间：60min；流速：0.8ml/min；ELSD参数：漂移管110℃，载气流速3.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计算应不低于5000。
[0253] [4.3.2]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0254] [4.3.3]供试品溶液的制备取制备好的注射剂内容物0.35g，精密称定，加水溶解至10ml，用等量的水饱和正丁醇振摇提取5次，合并正丁醇液，用等量的氨试液洗涤1次，分取正丁醇液，回收正丁醇，残渣用蒸馏水溶解并定容至5ml量瓶中，摇匀，即得。
[0255] [4.3.4]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0256] [4.3.5]结果将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰，并以其峰面积的对数作为1.000，根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算，共标定出10个共有峰，其相对保留时间分别为：0.441±10％、0.632±10％、0.942±10％、1.000、1.042±10％、1.062±10％、
1.089±10％、1.188±10％、1.701±10％、1.737±10％；并规定相对保留时间为
0.441±10％、0.632±10％、1.042±10％、1.089±10％的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)分别为0.688～1.148、0.673～1.121、0.692～1.154、0.688～1.146。
[0257] [4.4]生物碱指纹图谱
[0258] [4.4.1]色谱条件色谱柱：ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒径5μm；甲醇与0.1％磷酸-0.04％三乙胺水溶液为流动相，梯度条件见下表：
[0259] 梯度条件
[0260]
[0261] 柱温30℃；检测波长：235nm；分析时间：60min；理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000。
[0262] [4.4.2]内标溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加1％磷酸溶液3ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0263] [4.4.3]供试品溶液的制备精密量取制备好的注射剂内容物1.0g，加水溶解至10ml，置分液漏斗中，加氨试液调pH值至10，用等量的乙醚-氯仿(3∶1)的混合液振摇提取5次，合并萃取液，低温挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，加入内标溶液50μl，滤过，作为供试品溶液。
[0264] [4.4.4]测定法分别精密吸取内标溶液20μl和供试品溶液40μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0265] [4.4.5]结果将新乌头碱峰设定为相对保留时间的参照物峰，根据新乌头碱峰的保留时间计算，共标定出5个共有峰，其相对保留时间分别为：0.259±10％、0.342±10％、0.532±10％、0.724±10％、1.000±10％；并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为
0.532±10％的峰之峰面积作为1.000，并规定相对保留时间为0.724±10％的峰的相对峰面积比为0.455～0.683。
[0266] 本发明的药物制剂，保留了人参中的多糖类成分，可以添加起协同作用的药物，更加全面的保留和发扬了传统古方“参附汤”的优良药效，同时采用了先进的质量控制方法，如指纹图谱技术，使本发明的药物制剂的质量稳定可控，一改中药制剂的质量可控性较差的缺点。能发挥更好的临床疗效，为临床使用提供更多更好的用药选择。
[0267] 本发明的口服固体制剂携带服用方便，大幅减少了药物体积，改变了传统中药量大、携带服用不便的缺点；本发明的注射液的有效成分的种类比现有市售的参附注射液多，能更加全面的保留和发扬古方的疗效，起效迅速；本发明的注射用冻干制剂在注射液所有优点的基础上，储存时间更长，性质更稳定，起效迅速。同时本发明人通过大量的
正交筛选实验，优选适宜的制备方法，在本发明中可以采用超滤技术，除去大分子杂质，也可以再除去小分子杂质，更好的保证制剂的
稳定性。
[0268] 同时本发明的药物制剂的制备方法不繁琐，可以较好的控制成本。制成的制剂性质稳定，质量可控，可口服
给药或注射给药。可用于
治疗阳气暴脱的厥脱症(感染性、失血性、失液性休克等)；也可用于阳虚(气虚)所致的惊悸、怔忡、喘咳、胃疼、泄泻、痹症等，及其它原“参附汤”所治
疾病。能为临床使用提供更多更好的用药选择。
[0269] 本发明的药物制剂的主要药效学实验表明本发明的药物制剂具有优良的药理作用。
[0270] 从本发明的药物制剂的主要药效学实验中可以看出，本发明制得的“注射用参附(冻干)”，主要药效学实验表明在同等剂量下，其与目前市场上销售的参附注射液(雅安三九药业有限公司生产，批号：041103)相比，注射用参附(冻干)高剂量组延长小鼠常压耐缺氧的存活时间显著的更长，增加冠脉流量、抑制CK、LDH释放的作用更强。证明了本发明的有益效果。
具体实施方式
[0271] 下面将通过
实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容做进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明的技术特征所作的同等替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。
[0272] 实施例1
[0273] 处方：
[0274]
[0275] 制备方法：
[0276] (1)人参分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，药液浓缩至每1ml相当于含人参生药1.45～1.55g，每次加入等量的水饱和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参皂苷中间体，备用；
[0277] (2)醇提后的红参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，滤过，浓缩至药液浓度为0.75～0.85g生药/ml，温度为38～42℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.95～2.05g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液(或不离心，滤过后直接取滤液)，上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0278] 或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0279] 或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0280] 或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0281] 或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0282] 或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0283] 或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0284] (3)附子药材加8倍量水(第一次因为是干药材，多加2倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小时，滤过，浓缩至药液相对密度1.09～1.13，温度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量达70％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.27～1.31时加入95％的乙醇使醇含量达85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，即得附子中间体，备用；
[0285] 滤液加热至沸，保持微沸38～45分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用；
[0286] 或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用；
[0287] (4)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，过滤，浓缩成清膏；
[0288] (5)将除95％乙醇、硬脂酸镁外的辅料过60～80目筛，混匀，与“(4)”所得物混匀，加入适量的95％乙醇，制成软材，
挤压过20～24目筛制粒，40℃至65℃干燥1h至4h，过20目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，
[0289] (6)将上述颗粒压片，即得一种原料中含有人参和附子的片；
[0290] (7)将“(6)”所得片包
薄膜衣或包糖衣，即得原料中含有人参和附子的片剂；
[0291] (8)将“(5)”所得颗粒填充至胶囊，然后将所得胶囊
抛光，即得一种原料中含有人参和附子的胶囊。
[0292] 实施例2
[0293] 处方：
[0294]
[0295]
[0296]
[0297]
[0298]
[0299] 制备方法：
[0300] 备注：本实施例中同类制剂处方的制备方法相同。
[0301] (1)人参分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，药液浓缩至每1ml相当于含人参生药1.45～1.55g，每次加入等量的水饱和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参皂苷中间体，备用；
[0302] (2)醇提后的红参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，滤过，浓缩至药液浓度为0.75～0.85g生药/ml，温度为38～42℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.95～2.05g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液(或不离心，滤过后直接取滤液，用于口服液体制剂的制备)，
[0303] 上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，用于口服液体制剂的制备；
[0304] 或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，用于口服液体制剂、注射剂的制备；
[0305] 或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，用于口服液体制剂、注射剂的制备；
[0306] 或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用，用于口服液体制剂、注射剂的制备；
[0307] 或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用，用于口服液体制剂、注射剂的制备；
[0308] 或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用，用于口服液体制剂、注射剂的制备；
[0309] 或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用，用于口服液体制剂、注射剂的制备；
[0310] (3)附子药材加8倍量水(第一次因为是干药材，多加2倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小时，滤过，浓缩至药液相对密度1.09～1.13，温度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量达70％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.27～1.31时加入95％的乙醇使醇含量达85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液加热至沸，保持微沸38～45分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用；
[0311] 或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用；
[0312] (4)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，加纯化水或注射用水至全量，调节pH值至7.0，加热至沸，保持微沸38～42分钟，冷却，冷藏过夜；滤过，滤液调节pH值至7.0，加纯化水或注射用水调整体积至全量，测pH值，滤过，按剂量分装至口服液包装容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参和附子的口服液。
[0313] (5)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，加注射用水至全量，调节pH值至7.0，加热至沸，保持微沸40～45分钟，冷却，冷藏过夜；滤过，(调节pH值至7.0)，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸20～25分钟，滤过，调节pH值至7.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，过0.45μm微孔滤膜，按剂量分装至注射液包装用容器中，封口，常规方法灭菌，即得一种原料中含有人参和附子的注射液。
[0314] (6)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，加注射用水至全量，调节pH值至7.0，加热至沸，保持微沸40～45分钟，冷却，冷藏过夜；滤过，滤液中加入甘露醇/或山梨醇，搅匀，调节pH值至7.0，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸20～25分钟，滤过，调节pH值至7.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，过0.45μm微孔滤膜，无菌分装至管制注射剂玻璃瓶中，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂。
[0315] (7)冷冻干燥工艺如下：
[0316] a预冻阶段：预冻温度-56℃～-45℃，预冻时间约2.5～6小时；
[0317] b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-21℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。
[0318] c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间4～11小时。
[0319] 实施例3
[0320] 处方：
[0321]
[0322] 制备方法：
[0323] (1)人参分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，药液浓缩至每1ml相当于含人参生药1.45～1.55g，每次加入等量的水饱和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参皂苷中间体，备用；
[0324] (2)醇提后的红参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，滤过，浓缩至药液浓度为0.75～0.85g生药/ml，温度为37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.95～2.05g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液，将上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0325] (3)附子药材加8倍量水(第一次因为是干药材，多加2倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小时，滤过，浓缩至药液相对密度1.09～1.13，温度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量达70％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.27～1.31时加入95％的乙醇使醇含量达85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液加热至沸，保持微沸38～45分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用；
[0326] (4)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，加注射用水至全量，调节pH值至7.0，加热至沸，保持微沸40～45分钟，冷却，冷藏过夜；滤过，滤液中加入甘露醇，搅匀，调节pH值至7.0，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸20～25分钟，滤过，调节pH值至7.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，过0.45μm微孔滤膜，无菌分装至管制注射剂玻璃瓶中，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂。(备注：调节pH值使用1mol/L氢氧化钠溶液，或使用1mol/L盐酸溶液。)
[0327] (5)冷冻干燥工艺如下：
[0328] a预冻阶段：选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃，回温温度-11℃～-10℃，预冻时间约4～7小时。
[0329] b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-21℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。
[0330] c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间4～11小时。
[0331] 实施例4
[0332] 处方：
[0333]
[0334] 制备方法：
[0335] (1)人参分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，药液浓缩至每1ml相当于含人参生药1.45～1.55g，每次加入等量的水饱和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参皂苷中间体，备用；
[0336] (2)醇提后的红参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，滤过，浓缩至药液浓度为0.75～0.85g生药/ml，温度为37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.95～2.05g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液，将上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0337] (3)附子药材加8倍量水(第一次因为是干药材，多加2倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小时，滤过，浓缩至药液相对密度1.09～1.13，温度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量达70％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用；
[0338] (4)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，加注射用水至全量，调节pH值至7.0，加热至沸，保持微沸40～45分钟，冷却，冷藏过夜；滤过，滤液中加入甘露醇/或山梨醇，搅匀，调节pH值至7.0，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸20～25分钟，滤过，调节pH值至7.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，过0.45μm微孔滤膜，无菌分装至管制注射剂玻璃瓶中，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂。(备注：调节pH值使用1mol/L氢氧化钠溶液，或使用1mol/L盐酸溶液。)
[0339] (5)冷冻干燥工艺如下：
[0340] a预冻阶段：选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃，回温温度-11℃～-10℃，预冻时间约4～7小时。
[0341] b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-21℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。
[0342] c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间4～11小时。
[0343] 实施例5
[0344] 处方：
[0345]
[0346] 制备方法：
[0347] (1)人参分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，药液浓缩至每1ml相当于含人参生药1.45～1.55g，每次加入等量的水饱和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参皂苷中间体，备用；
[0348] (2)醇提后的红参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，滤过，浓缩至药液浓度为0.75～0.85g生药/ml，温度为37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.95～2.05g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量达70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液，[0349] 或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0350] 或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0351] 或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0352] 或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0353] 或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0354] 或上一步所得上清波先用截留分子量500K超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0355] (3)附子药材加8倍量水(第一次因为是干药材，多加2倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小时，滤过，浓缩至药液相对密度1.09～1.13，温度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量达70％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.27～1.31时加入95％的乙醇使醇含量达85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液加热至沸，保持微沸35～45分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用；
[0356] 或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用；
[0357] (4)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，加注射用水至全量，调节pH值至7.0，加热至沸，保持微沸40～45分钟，冷却，冷藏过夜；滤过，滤液中加入甘露醇，搅匀，调节pH值至7.0，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸20～25分钟，滤过，调节pH值至7.0，加注射用水调整体积至全量，测pH值，过0.45μm微孔滤膜，无菌分装至管制注射剂玻璃瓶中，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂。
[0358] (5)冷冻干燥工艺如下：
[0359] a预冻阶段：选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃，回温温度-11℃～-10℃，预冻时间约4～7小时。
[0360] b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-21℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。
[0361] c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间4～11小时。
[0362] 实施例6
[0363] 处方：
[0364]
[0365]
[0366] 制备方法：
[0367] (1)人参分别加6倍量(第一次因为是干药材，多加1倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，药液浓缩至每1ml相当于含人参生药1.45～1.55g，每次加入等量的水饱和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至无正丁醇味，转水溶，滤过，得人参皂苷中间体，备用；
[0368] (2)醇提后的红参药渣分别加9倍量水(第一次因为是干药材，多加3倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小时，滤过，浓缩至药液浓度为0.75～0.85g生药/ml，温度为37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量达到80％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，合并上清液，调整上清液药液浓度为1.95～2.05g生药/ml，加入95％的乙醇使含醇量述70％，静置过夜，滤过，沉淀干燥，加适量水溶解后，离心，取上清液，[0369] 上一步所得上清液采用截留分子量100K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0370] 或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0371] 或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超滤膜超滤，超滤液即为人参的多糖类成分中间体，备用；
[0372] 或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0373] 或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0374] 或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量2K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0375] 或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超滤膜超滤，然后将所得超滤液用截留分子量5K的超滤膜除去小分子量杂质，即得人参的多糖类成分中间体，备用；
[0376] (3)附子药材加8倍量水(第一次因为是干药材，多加2倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小时，滤过，浓缩至药液相对密度1.09～1.13，温度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量达70％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，调整药液的相对密度为1.27～1.31时加入95％的乙醇使醇含量达85％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液加热至沸，保持微沸38～45分钟，冷却，冷藏，滤过，即得附子中间体，备用；
[0377] 或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味，调整药液至每1ml相当于含人参生药0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至尽，转水溶，滤过，即得附子中间体，备用；
[0378] (4)将“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体合并，混匀，加注射用水至全量，调节pH值至7.0，加热至沸，保持微沸40～45分钟，冷却，冷藏过夜；滤过，滤液中加入盐酸纳洛酮/或盐酸多巴胺(盐酸纳洛酮/或盐酸多巴胺已溶于少量水中，调整水溶液pH值至7左右，并过滤)、甘露醇，搅匀，调节pH值至7.0左右，加入0.1％活性炭加热至沸，保持微沸20～25分钟，滤过，调节pH值至7.0左右，加注射用水调整体积至全量，测pH值，过0.45μm微孔滤膜，无菌分装至管制注射剂玻璃瓶中，冷冻干燥，压盖、轧盖，即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂。
[0379] (5)冷冻干燥工艺如下：
[0380] a预冻阶段：预冻温度-56℃～-45℃，预冻时间约2.5～6小时；或选择反复预冻，预冻温度-56℃～-45℃，回温温度-11℃～-10℃，预冻时间约4～7小时。
[0381] b升华干燥阶段：当冷凝器的温度降至-56℃～-45℃以下，开启真空泵，将搁板的温度设置在-21℃～-19℃，制品慢慢升温，观察升华界面，至游离水全部走净，升华干燥阶段结束。
[0382] c再干燥阶段：搁板温度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法来判断再干燥的终点，再干燥时间4～11小时。
[0383] 实施例7
[0384] 以下是本发明的药物制剂的主要药效学试验。
[0385] 1实验目的及内容
[0386] 根据注射用参附(冻干)的临床用途，在动物上进行主要药效学验证，主要进行以下实验：注射用参附(冻干)高、中、低剂量组对对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响，对垂体持叶素(Pit)所致大鼠急性心肌缺血的影响，对急性大鼠血瘀模型的影响，对离体大鼠心脏缺血
再灌注损伤的影响，对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞的影响，对麻醉犬血流动力学的影响。
[0387] 2实验材料
[0388] 2.1受试药物：注射用参附(冻干)，由天津市轩宏医药技术有限公司提供，批号：040710，采用本发明实施例3所用处方和制备方法制成。临用前用一定体积的0.9％的氯化钠注射液配制成所需要的浓度。
[0389] 2.2药品与试剂：
[0390] 参附注射液，雅安三九药业有限公司，批号：041103(即为本实验中所指的参附原药组所用药品)；
[0391] 丹参注射液，正大青春宝药业有限公司，批号：0405202；
[0392]
硝酸甘油注射液，北京益民药业有限公司，批号：040217；
[0393] 肝素钠注射液，常州生物千红制药有限公司，批号：040615；
[0394] 枸椽酸钠，上海实意化学试剂有限公司，批号：040128；
[0395] 盐酸肾上腺素，天津金耀氨基酸有限公司，批号：0403031；
[0396] 戊巴比妥钠，北京化学试剂公司，批号：020402；
[0397] 垂体后叶素，上海第一生化药业有限公司，批号：040501；
[0398] 乌拉坦，中国医药公司上海化学试剂公司，批号20021104；
[0399] 乳酸脱氢酶(LDH-L)
试剂盒，sysmex济南希森美康医用有限公司，批号：ZG4001；
[0400] 肌酸激酶(CK)试剂盒，sysmex济南希森美康医用有限公司，批号：ZG4004；
[0401] 氯化钠，AR级，上海实意化学试剂有限公司，批号：050705；
[0402]
氯化钾，AR级，上海凌峰化学试剂有限公司，批号：021031；
[0403]
氯化钙，AR级，上海凌峰化学试剂有限公司，批号：030619；
[0404]
碳酸氢钠，AR级，上海虹光化工厂，批号：030604；
[0405] 葡萄糖，AR级，上海精析化工科技有限公司，批号：030823；
[0406] 活化部分凝血酶原时间(APTT)测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司批号：ST20201-20；
[0407] 纤维蛋白原(FIB)测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司批号：ST20401-16；
[0408] 凝血酶原时间(PT)测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司批号：ST10101-22；
[0409] 洛氏液配制：NaCl 9.0g/L，KCl 0.42g/L，CaCl20.24g/L，NaHCO30.2g/L，Glu 1.0g/L；
[0410] 甲醛：南京化学试剂厂，批号：20040721。
[0411] 2.3实验仪器
[0412] RM-6000八道生理记录仪及附件，日本NIHON KOHDEN公司；
[0413] DH140人工呼吸器，浙江医科大学医学仪器实验厂；DHG-9053A型电热恒温干燥箱，上海医用恒温设备厂；FA2104上皿
电子天平，上海天平仪器厂；
[0414] JNA型精密扭力天平，上海第二天平仪器厂；
心电图仪，日本NIHON KOHDEN公司；Vitalab 200型全自动生化分析仪，荷兰vital scientific公司；
[0415] BT01-100型恒流泵，保定兰格恒流泵有限公司；灌流装置：自制Langendorff灌流装置；
[0416] LMS-2B型二道生理记录仪，成都仪器厂；WC/09-05恒温槽，中国重庆
银河试验仪器有限公司。
[0417] 2.4动物
[0418] 昆明种小鼠，体重18～22g；SD大鼠，体重180-220g；家兔，体重2.0～2.4kg，雌雄各半，均由上海斯莱克实验动物责任有限公司供给。合格证：SCXK(沪)2003-0003。
[0419] 杂种犬，体重7-10kg，雌雄兼用，均由南京中医药大学动物中心收购自市郊的杂种犬，实验前在该中心驯养，经检疫及驱虫后，用于该项实验。
[0420] 3实验方法与结果
[0421] 数据以均数±标准差表示(X±S)。所有计量资料采用Student-t检验，计数资料采用秩和检验。
[0422] 变化率(发生率)％＝(X给药后-X给药前)/X给药前×100％
[0423] X给药后为给药后观测值，X给药前为给药前观测值。
[0424] 3.1对小鼠常压耐缺氧的影响
[0425] 3.1.1实验方法：取昆明种小鼠120只，雌雄各半，随机分为6组，即对照组(给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(丹参注射液20.0g生药/kg)、参附原药组(3.2g生药/kg)、注射用参附(冻干)高、中、低(3.2、1.6、0.8g生药/kg)。各组均通过尾静脉给药，给药容积为20ml/kg。静脉给药15min后，将小鼠置于125ml密闭广口瓶中(内置钠石灰20g)。以小鼠张口呼吸停止为小鼠死亡标志，记录小鼠的存活时间，超过60min的以60min计。
[0426] 3.1.2实验结果：
[0427] 实验结果见表1。
[0428] 表1注射用参附(冻干)对小鼠常压耐缺氧的保护作用(X±SD)
[0429]
[0430] 与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
[0431] 与注射用参附(冻干)高剂量组比较：▲：P＜0.05。
[0432] 结果显示，注射用参附(冻干)高、中剂量组及参附原药组均能延长小鼠常压耐缺氧的存活时间，与对照组比较差异显著(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05)，且参附(冻干)高剂量组小鼠存活时间显著长于原药组(P＜0.05)。
[0433] 3.2对垂体后叶素(Pit)所致大鼠心肌缺血的影响
[0434] 3.2.1实验方法：取健康SD大鼠56只，雌雄各半，体重180～220g，随机分为7组，即：正常组、模型组(以上两组给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(硝酸甘油0.5mg/kg)、注射用参附(冻干)低、中、高(0.4、0.8、1.6g生药/kg)3个剂量组、参附原药组(1.6g生药/kg)。实验前大鼠禁食不禁水12h，
腹腔注射乌拉坦1g/kg麻醉，取仰卧位，针状
电极小心刺入四肢皮下，测定II
导联心电图，手术后稳定15min，并记录正常心电图。各组动物分别经尾静脉注射给药，15min后，除正常对照组外，各组分别经舌下静脉注射垂体后叶素1.5u/kg，注射时间不超过5s。立即记录注射垂体后叶素后15s、30s、1min、2min、3min、5min、7min、10min、15min的心电图。
[0435] 观察指标主要定为T波高度变化、心率变化。T波高度测量以PR段为基线，每时间点测3个连续的波型，取其平均值。记录并计算T波高度的变化值(无论升高或降低，取变化的绝对值)。对于T波高度变化及心率等时序关系的动态观察指标，在每个时间点上，以用药后的变化值作组间t检验。
[0436] 20.3.2.2实验结果：
[0437] 实验结果见表2、表3。
[0438] (1)注射用参附对垂体后叶素所致心肌缺血大鼠心电图T波位移的影响，见表2。
[0439] 表2对垂体后叶素所致心肌缺血大鼠心电图T波的影响 (n＝8)
[0440]
[0441] 与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与参附高剂量组比较*P＜0.05
[0442] 正常对照组大鼠静脉注射垂体后叶素后，心电发生明显改变，第一期(1～30s)出现明显的T波高耸；第二期(30s以后)，呈现明显的T波低平或倒置。
[0443] 注射用参附(冻干)高、中、低剂量及原药组在15s时间点可显著对抗垂体后叶素引起的心电T波位移(P＜0.01)，参附(冻干)高、中剂量及原药组在30s时间点可显著对抗垂体后叶素引起的心电T波位移(P＜0.05)，且高、中、低剂量之间存在一定的量效关系，参附高剂量组与原药比在15s、30s、1min、5min也显著性差异(P＜0.05)。
[0444] (2)注射用参附对垂体后叶素所致心肌缺血大鼠心率的影响，结果见表3。
[0445] 表3对垂体后叶素所致心肌缺血大鼠心率的影响 (n＝8)
[0446]
[0447] 与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01；
[0448] 正常对照组大鼠静脉注射垂体后叶素后，可使大鼠心率明显减慢，至15min仍未恢复。注射用参附(冻干)高剂量在10min时能缓解垂体后叶素所致的心率减慢，参附原药在2min时能缓解垂体后叶素所致的心率减慢，与模型组比差异显著(P＜0.05)，但参附(冻干)高剂量与参附原药相比在缓解垂体后叶素所致的心率减慢的作用上并无显著差异(P＞0.05)。
[0449] 3.2.3结论：
[0450] 注射用参附(冻干)高、中、低剂量及原药能明显对抗垂体后叶素引起的心电图T段的变化且高、中、低剂量之间存在一定的量效关系，参附(冻干)高剂量及原药在某些时间点能缓解垂体后叶素所致的心率减慢，提示注射用参附(冻干)具有一定的对抗垂体后叶素所致心肌缺血的作用。
[0451] 3.3对急性血瘀模型大鼠血液
流变学的影响
[0452] 3.3.1实验操作方法：
[0453] 取SD雄性大鼠56只，体重350～450g，随机分为7组，即正常对照组、模型组(以上两组给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(10g生药/kg丹参注射液)、注射用参附(冻干)低、中、高(0.4、0.8、1.6g生药/kg)3个剂量组、参附原药组(1.6g生药/kg)，给药容积为5ml/kg，静脉连续给药3天，于第2次给药后，除正常对照组外，各组动物皮下注射盐酸肾上腺素注射液(Adr)0.8ml/kg共2次，间隔4h，在第二次注射Adr之前，将大鼠置于冰水中浸泡5min，造成血瘀症模型。禁食，于手术前15min给药1次，以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，仰位固定，颈动脉
插管放血，用3.8％的枸椽酸钠或肝素钠生理盐水溶液(500ul/ml)按1∶9抗凝，检测血液流变学的各项指标。
[0454] 3.3.2实验检测指标
[0455] (1)对大鼠血小板聚集率的影响
[0456] 将3.8％的枸椽酸钠抗凝的血液以800r/min离心10min，取富血小板
血浆(PRP)，剩余部分以3000r/min离心，取贫血小板血浆(PPP)，利用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪记录最大聚集率并按下列公式计算抑制率。聚集抑制率(％)
[0457] ＝[(模型组最大聚集率-给药组最大聚集率)/模型组最大聚集率]×100％
[0459] ①
全血粘度：将肝素抗凝的血液采用LG-R-80系列血液粘度仪测定。
[0460] ②血浆粘度：全血测试完毕后，剩余血样以3000r/min离心，进行血浆粘度的测试。
[0461] ③红细胞
变形能力、红细胞聚集能力检测：将肝素抗凝的血液采用LG-R-190型红细胞变形/聚集能力测定仪。
[0462] (3)凝血系统的检测：
[0463] 将3.8％的枸椽酸钠抗凝的血液以3000r/min离心10min，分离贫血小板血浆，采用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪测定活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、血浆纤维蛋白原(FIB)。
[0464] 3.3.3实验结果
[0465] 实验结果见表4～表7。
[0466] (1)注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠血小板聚集率的影响，结果见表4。
[0467] 表4注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠血小板聚集率的影响(X±s)
[0468]
[0469] 与模型组比较：**P＜0.01，*P＜0.05。
[0470] (2)注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠红细胞变形及聚集能力的影响，结果见表5。
[0471] 表5注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠红细胞变形及聚集能力的影响(X±s)[0472]
[0473] 与模型组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。
[0474] (3)注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠APTT、PT、FIB的影响，结果见表6。
[0475] 表6注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠APTT、PT、FIB的影响(n＝8，X±s)[0476]
[0477]
[0478] 与模型组比较：*P＜0.05。
[0479] (4)注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠血液粘度的影响，结果见表7。
[0480] 表7注射用参附(冻干)对血瘀症模型大鼠血液粘度的影响(n＝8，X±s)
[0481]
[0482] 与模型组比较：*P＜0.05；**P＜0.01
[0483] 结果：参附(冻干)高剂量可以抑制血小板聚集、降低红细胞聚集能力、降低全血粘度(低切)及血浆粘度，延长血浆PT、降低血浆纤维蛋白(FIB)含量，与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)。中剂量亦可抑制血小板聚集、降低全血粘度(低切)及血浆粘度，与模型组比较差异显著(P＜0.05)。参附原药可以抑制血小板聚集、降低红细胞聚集能力、降低全血粘度(低切)及血浆粘度，延长血浆PT、降低血浆纤维蛋白(FIB)含量，与模型组比较差异显著(P＜0.05)；但参附原药与参附(冻干)高剂量相比并无显著差异(P＞0.05)。
[0484] 3.4对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响
[0485] 3.4.1实验操作：
[0486] (1)分组与剂量
[0487] 取SD大鼠56只，体重200g～300g，随机分为7组，每组8只，雌雄各半。即(1)正常对照组：含氧洛氏液；(2)模型组：氮饱和洛氏液；(3)阳性药组：氮饱和丹参注射液，1.3mg/ml；(4)注射用参附(冻干)高剂量组：氮饱和参附，0.31mg/ml；(5)注射用参附(冻干)中剂量组：氮饱和参附0.16mg/ml；(6)注射用参附(冻干)低剂量组：氮饱和参附，
0.08mg/ml；(7)参附原药组：氮饱和原参附注射液，0.31mg/ml。所用药物均用洛氏液配制。
[0488] 大鼠尾静脉注射肝素钠(1000U/kg)，15min后击晕，开胸，将心脏迅速取出，移至贮有4℃洛氏液的培养皿中，尽量
洗出心脏血液，在液面下迅速把主动脉接于灌流的
套管上，并以线结扎固定。立即以含氧洛氏液进行灌流。灌注压70cm水柱，灌流温度38±0.5℃，流速11.5±0.5ml/min。用蛙心夹挂住心尖部并与换能器相连，连于二道生理记录仪描记心率变化。心脏复跳及心率显示正常后，稳定30min，再进行实验，该期间出现
心律失常者弃去。
[0489] (2)方法：
[0490] 采用缺氧再灌注损伤方法造模：
[0491] 模型组：以含氧洛氏液灌流30min使心脏工作稳定后，调节三通
开关至预先氮饱和洛氏液的灌
流管一侧，改用预先氮饱和洛氏液作为缺氧灌注40min，再恢复含氧洛氏液灌流40min。造成缺氧再灌注损伤模型。
[0492] 阳性药组和各给药组：方法基本同上，仅在用预先氮饱和洛氏液作缺氧灌注时加入不同药物灌注40min。
[0493] 正常对照组：以含氧洛氏液灌流110min。
[0494] 记录正常以及再灌注后第20、40min时冠脉流量及心率，测定各点灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的溢出量，计算变化率。实验结束后，用10％甲醛固
定心脏，作病理
组织学检查。
[0495] 下降率％＝(停灌前-再灌注后)/停灌前×100％
[0496] 上升率％＝(再灌注后-停灌前)/停灌前×100％
[0497] 3.4.2统计学处理采用Student-t检验。
[0498] 3.4.3结果见表8～表11。
[0499] (1)注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏心率的影响，结果见表8。
[0500] 表8注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏心率的影响(X±S)(n＝8)
[0501]
[0502] 与模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。
[0503] 实验结果：各组在停灌前心率均无差异，在再灌注后20min和40min时，注射用参附(冻干)高、中、低剂量组心率均低于模型组，下降率与模型组比较，有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。注射用参附(冻干)高剂量组心率下降率与同浓度参附原药相比，无统计学差异(P＞0.05)。
[0504] (2)注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏冠脉灌流量的影响，结果见表9。
[0505] 表9注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏冠脉灌流量的影响(X±S)(n＝8)
[0506]
[0507] 与模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。
[0508] 实验结果：各组在停灌前灌流量与正常组比较均无差异，在再灌注后20min和40min时，注射用参附(冻干)高、中剂量组灌流量明显高于模型组，其下降率低与模型组，有显著性差异(P＜0.01)。参附(冻干)低剂量组灌流量下降率均低于模型组，但无统计学意义(P＞0.05)。参附(冻干)三个剂量组在对冠脉灌流量的影响上，呈现出一定的量效关系。参附(冻干)高剂量组冠脉灌流量下降率低于参附原药组，但无统计学差异(P＞
0.05)。
[0509] (3)注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏CK的影响，结果见表10。
[0510] 实验结果：各组在停灌前CK值与正常组比较均无差异，在再灌注后20min和40min时，注射用参附(冻干)高、中、低剂量组CK值显著低于模型组，其上升率与模型组比较，低于模型组，有显著性差异(P＜0.01)。参附(冻干)三个剂量组均能抑制心肌细胞损伤所致CK溢出，呈现出一定的量效关系。参附(冻干)高剂量组CK值上升率低于同浓度参附原药组，但无统计学差异(P＞0.05)。
[0511] 表10注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏CK的影响(X±S)(n＝8)
[0512]
[0513] 与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
[0514] (4)注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏LDH的影响，结果见表11。
[0515] 表11注射用参附(冻干)对缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏LDH的影响(X±S)(n＝8)
[0516]
[0517] 与模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。高剂量组与对照组比较▲P＜0.05。
[0518] 实验结果：各组在停灌前LDH值与正常组比较均无差异，在再灌注后20min和40min时，注射用参附(冻干)高、中剂量组LDH值均低于模型组，其上升率与模型组比较，有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。参附(冻干)低剂量组在再灌注后20min时，LDH上升率低于模型组(P＜0.05)，再灌注后40min时，上升率亦低于模型组，但无统计学意义(P＞0.05)。参附(冻干)三个剂量组均能抑制心肌细胞损伤所致LDH溢出，呈现出一定的量效关系。参附(冻干)高剂量组LDH值均低于同浓度参附原药组，且有一定差异(P＜0.05)，高剂量组LDH上升率低于同浓度参附原药组，但无统计学差异(P＞0.05)。
[0519] 3.4.4结论：
[0520] 注射用参附(冻干)高、中剂量组在再灌注后20min和40min时，心率、灌流量下降率及CK、LDH上升率，均低于模型组(P＜0.01，P＜0.05)。提示参附(冻干)高、中剂量组能改善缺氧再灌注损伤所造成的心率下降，同时增加冠脉流量，抑制CK、LDH释放。其中参附(冻干)高剂量组增加冠脉流量、抑制CK、LDH释放的作用显示出强于同浓度参附原药组的趋势。
[0521] 注射用参附(冻干)低剂量组在再灌注后20min和40min时，心率下降率、CK上升率均与模型组有一定差异(P＜0.05，P＜0.01)，在再灌注后20min时，LDH上升率低于模型组(P＜0.05)。提示注射用参附(冻干)低剂量组能改善缺血再灌注所造成的心率下降、抑制CK、LDH释放。
[0522] 缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏结果表明，注射用参附(冻干)主要通过改善缺氧再灌注损伤所造成的心率下降、扩张
冠状动脉、抑制心肌酶的溢出来发挥对心脏的保护作用，同时具有一定扩张冠状动脉、增加冠脉流量，改善缺氧再灌注损伤所造成的心率下降的作用，三个剂量组在对冠脉灌流量和CK，LDH的影响上，均呈现出一定的量效关系。
[0523] 大鼠离体心脏缺血再灌注损伤组织病理检查报告显示：注射用参附(冻干)对大鼠离体心肌缺血再灌注所致损伤有一定的保护作用。
[0524] 3.5对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞的影响
[0525] 3.5.1实验方法
[0526] 取家犬35只，体重为7-10kg，随机分为7组，每组5只动物，雌雄兼用：(1)假手术组：给予等容积生理盐水。(2)模型组：给予等容积生理盐水。(3)阳性药物丹参注射液对照组：2.0g生药/kg。(4)注射用参附(冻干)低剂量组：0.2g生药/kg。(5)注射用参附(冻干)中剂量组：0.4g生药/kg。(6)注射用参附(冻干)高剂量组：0.8g生药/kg。(7)参附原药对照组：0.4g生药/kg。将各组动物所用药物溶于0.9％氯化钠注射液中，给药容积为1ml/kg。
[0527] 家犬由前肢小隐静脉用3％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后，背位固定于手术台上，剪去颈部、胸部和左后肢内侧的毛。将针状电极插入犬四肢皮下，记录心电图(ECG)。分离气管并插入气管插管。分离左侧股动脉、股静脉，分离股静脉插入静脉插管，缓慢恒速输入生理盐水(约1ml/min)；分离股动脉插入动脉插管(管内充满500u/ml的肝素生理盐水)接压力换能器(TP-400T)，经放大(AP-641G)测量动脉收缩压(SAP)、动脉舒张压(DAP)、平均动脉压(MAP)，定标灵敏度为13.33kPa(100mmHg)/cm。联接记录仪的连线板直接由动脉压触发心率记数仪(AT-601G)记录心率(HR)。于左侧第四、五肋间开胸，暴露心脏，并接人工
呼吸机。打开心包膜，缝于胸壁，做成荷包摇篮。暴露右心
耳，静注肝素5-10mg/kg使肝素化，用心耳钳夹住右心耳，作一荷包缝口，将缝线穿于一小段橡皮管内，用小
钢丝将线勾入橡皮管，于荷包口中心剪一小口，迅速插入冠状窦插管(内径4-5mm，管口为斜
角，近管口处为圆形膨大，斜角面避免管口与窦壁紧贴，膨大部为使冠状窦血不致外溢)，将小橡皮管内荷包缝线拉紧，靠小橡皮管顶住插管，以避免出血，迅速将插管准确插入冠状窦，结扎右心耳处荷包缝线，固定插管。该插管的远端连接一三通管以备取血。用0号丝线结扎左冠状动脉前降支中下1/3处，假手术组只穿线不结扎。选择梗塞区附近位置12个标测点缝置心外膜电图电极，并在远离梗塞区选一对照点，用手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测，经
传感器(JB-642G)、
放大器(AB-621G)，用八道生理记录仪记录心外膜电图(EECG)(定标：1mm＝1mv)。结扎15min后经股静脉恒流泵恒速给药(1ml/min)，直接记录动脉收缩压(SAP)、舒张压(DAP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)，并描记EECG及动脉压(BP)曲线。记录结扎前、结扎15min和给药后5、15、30、60、90、120min的EECG、SAP、DAP、MAP、HR。统计各标测点EECG的ST段偏移∑-ST，以及ST段抬高≥2mv以上的N-ST。各组分别于给药前和给药60min后，左心室取血测动脉血氧，冠状窦处取血测冠状窦血氧，两者氧差反映心肌耗氧；各组分别于结扎前、结扎15min、给药60min后股静脉取血，用试剂盒测定血清CK、LDH值。实验结束后，立即取出心脏，用生理盐水洗去血液后，称取全心重和心室重量，并把心室横切成5片，置于37℃1％TTC溶液中
染色15min，剪去各心肌片被染色的非梗塞区，把未染色的梗塞区心肌称重，除以全心重或心室重分别得到梗塞范围占全心重或占心室重的百分率。
[0528] 心肌耗氧量(kpa/min)＝MAP*HR
[0529] 3.5.2实验结果
[0530] (1)注射用参附(冻干)对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞BP(SAP、DAP、MAP、HR和心肌耗氧量的影响
[0531] 实验结果表明：注射用参附(冻干)高，中剂量组能降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬的DAP、MAP、HR和心肌耗氧量，与模型组比较有明显差异(P＜0.05，P＜0.01)，并且其中中剂量组与参附原药组比较有显著性差异(P＜0.05)。
[0532] (2)注射用参附(冻干)对麻醉犬动静脉血氧气分压(Po2)、动静脉血二氧化碳分压(Pco2)的影响
[0533] 结果表明：注射用参附(冻干)高、中剂量组与模型组比较，可显著抑制冠脉结扎所致的动静脉氧差增加(P＜0.05)，且其中剂量组与参附原药组比较某些点有显著性差异(P＜0.01)。
[0534] (3)注射用参附(冻干)对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞∑-ST的影响
[0535] 结果表明：注射用参附(冻干)高、中、低剂量组可降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬∑-ST，部分时间点与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)，表明注射用参附(冻干)能明显减轻心肌缺血程度，且其中剂量组与参附原药组比较某些点有显著性差异(P＜0.01)。
[0536] (4)注射用参附(冻干)对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞N-ST的影响
[0537] 结果表明：注射用参附(冻干)高、中、低剂量组可降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬N-ST，部分时间点与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)，且其中剂量组与参附原药组某些点比较有显著性差异(P＜0.01)。
[0538] (5)注射用参附(冻干)对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞的血清CK、LDH的影响。
[0539] 实验结果表明：注射用参附(冻干)高、中、低剂量组，可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞后血清中CK、LDH的释放，与模型组比较差异显著(P＜0.01)。
[0540] (6)注射用参附(冻干)对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞梗塞范围的影响
[0541] 实验结果表明：注射用参附(冻干)高、中剂量组可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞梗塞范围，与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)，且其中剂量组与参附原药组比较有显著性差异(P＜0.01)。
[0542] 3.5.3结论：
[0543] 麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞实验结果表明：注射用参附(冻干)高，中剂量组能降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬的DAP、MAP、HR和心肌耗氧量，抑制冠脉结扎所致的动静脉氧差增加，部分时间点与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)；高、中、低剂量组可降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬∑-ST，N-ST，部分时间点与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)；高、中、低剂量组可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞后血清中LDH和CK的释放，与模型组比较差异显著(P＜0.05)，以上个指标原药组与中剂量组比较差异显著。表明注射用参附(冻干)能明显减轻心肌缺血程度。
[0544] 3.6对麻醉犬血流动力学的影响[5-6]
[0545] 3.6.1实验方法：
[0546] 取家犬30只，雌雄兼用，随机分为6组，每组5只动物，即(1)正常对照组：给予等容积生理盐水；(2)阳性药丹参注射组：2.0g生药/kg。(3)注射用参附(冻干)低剂量组：0.2g生药/kg。(4)注射用参附(冻干)中剂量组：0.4g生药/kg。(5)注射用参附(冻干)高剂量组：0.8g生药/kg。(6)参附原药组：0.4g生药/kg，将各组动物所用药物溶于
0.9％氯化钠注射液中，给药容积为1ml/kg。
[0547] 用3％戊巴比妥钠30mg/kg前肢皮下头静脉麻醉，背位固定于手术台上，颈部、胸部和左后肢内侧去毛备用。分离气管并插入气管插管；分离股静脉插入静脉插管，缓慢恒速输入生理盐水(约1ml/min)；分离股动脉插入动脉插管(管内充满500u/ml的肝素生理盐水)，以测量动脉血压。人工呼吸下，于第4肋间开胸，剪开心包膜，缝于胸壁，分离升主动脉根部和左冠状动脉前降支，放置适宜内径的电磁血流量计
探头(12mm，2mm)，连接于电磁血流量计上测量心输出量(CO)和冠脉流量(CBF)。将左心室插管(管内充满肝素生理盐水)经左心室心尖部创口插入左心室内，测量左室内压(LVSP)、左室舒张末期压力(LVEDP)、室内压最大上升速率(LVdp/dtmax)；将针状电极插入犬四肢皮下，记录心电图(ECG)。待稳定后，用恒流泵经股静脉给药(1ml/min)，直接记录动脉收缩压(SAP)、舒张压(DAP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心输出量(CO)、冠脉流量(CBF)，并于八道生理记录仪上描记ECG、左室内压(LVSP)、LVdp/dtmax、LVEDP及动脉压(BP)曲线。测量并计算给药前后各时间段麻醉犬的BP(SAP、DAP、MAP)、HR、CO、CBF、LVSP、LVEDP、+dp/dtmax(心肌收缩参数)、-dp/dtmax(心肌舒张参数)、t～dp/dtmax(左室开始收缩至左室内压上升速率峰值时间)、射血时间、SV(每搏输出量)、CI(心脏指数)、SI(心搏指数)、LVWI(左室作功指数)、TTI(总耗氧指数)、TPVR(总外周血管阻力)。
[0548] 计算公式：
[0549] CI(心脏指数)＝CO/体表面积；SV(每搏输出量)＝CO*1000/HR；
[0550] SI(心搏指数)＝CI*1000/HR；TTI(总耗氧指数)＝MAP*HR*射血时间；
[0551] TPVR(总外周血管阻力)＝MAP/CO；
[0552] LVWI(左室作功指数)＝CI*1.025*(SAP-0.667)*13.6*0.001
[0553] 3.6.2实验结果
[0554] (1)注射用参附(冻干)对麻醉犬SAP、DAP、MAP、HR的影响
[0555] 结果表明：注射用参附(冻干)高、中剂量组能降低麻醉犬的DAP，减慢心率，与正
