技术领域
[0001] 本
发明属药物制剂领域,具体涉及一种新型的用于肿瘤光动力治疗联合免疫治疗的纳米制剂,它是由
光敏剂、免疫检查点阻断剂和辅料组成的粒径在纳米范围的药物剂型。更具体地说,本发明将药物通过制剂学手段修饰,能达到以下目的:与常规
给药系统和给药方法相比,能够提高光敏剂和/或免疫检查点阻断剂到达肿瘤部位的量,和/或实现肿瘤中药物的
定位释放,在增强治疗效果的同时,降低全身性毒
副作用。
背景技术
[0002]
现有技术公开了免疫检查点的阻断是继手术、放疗、化疗、
分子靶向治疗后又一种新型的
恶性肿瘤治疗方法,近年来取得了显著的临床治疗效果,已成为肿瘤治疗的研究热点。免疫检查点是指在免疫系统中起到调节免疫细胞活性的
信号分子通路,它对于维持自身耐受和调节T细胞应答的持续性和强度发挥重要作用。研究显示,恶性肿瘤可以通过免疫检查点抑制T细胞的激活,从而逃避免疫杀伤。
[0003] 有研究报道,采用单克隆
抗体阻断免疫检查点,能够阻断抑制性免疫信号,激活T细胞,使病人产生有效且持久的抗肿瘤响应;抗免疫检查点抗体,如抗细胞毒性T淋巴细胞
抗原-4(CTLA-4)抗体治疗可以抑制调节性T细胞(Treg),增加CD8T细胞/Treg的比例;抗程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)抗体以及抗PD-1配体(Programmed death-ligand 1,PD-L1)抗体治疗,可以阻断PD-1/PD-L1通路,改善肿瘤的免疫抑制性微环境;实践显示,虽然免疫检查点阻断疗法在临床研究中取得了很好的治疗效果,但是病人的总体响应率不高,其对部分病人治疗无效。
[0004] 光动力疗法是一种联合无毒性/低毒性的光敏剂及相应的
光源,通过光动力学反应产生
活性氧簇,破坏肿瘤组织的治疗技术;由于进入组织的光敏剂只有达到一定浓度并受到足量光照射,才会引发光动力学反应而杀伤靶细胞,因此它是一种高特异性且安全的局部治疗方法;活性氧簇引起的损伤在杀死肿瘤细胞、释放肿瘤相关抗原的同时,引起局部急性
炎症,诱导宿主免疫反应,然而光动力疗法并不能产生持续、强烈的免疫反应,这主要是由于肿瘤的免疫抑制性微环境,不能有效的诱导T细胞介导免疫应答。
[0005] 近年来的实验和临床研究结果证实,将免疫检查点的阻断治疗与光动力疗法相结合,能够产生协同治疗效果,并能够抑制转移性肿瘤;其中,一方面,光动力治疗直接杀死、杀伤肿瘤细胞,使肿瘤特异性抗原得到释放,增加免疫细胞侵润至肿瘤部位,另一方面,通过免疫检查点的阻断逆转肿瘤免疫抑制性的微环境,协同光动力疗法激活
机体免疫细胞,诱导宿主产生强烈持久的免疫应答,杀死残余肿瘤细胞。
[0006] 研究者认为,实现上述
联合治疗的关键是设计提供一种药物制剂,它能够同时携载免疫检查点阻断剂与光敏剂,实现这两种药物在肿瘤部位的联合递送。目前,尚未见相关制剂的研究报道。
发明内容
[0007] 本发明的目的是针对现有技术的
缺陷,提供一种新型的用于肿瘤光动力治疗联合免疫治疗的纳米制剂。
[0008] 本发明运用制剂学技术,制备能同时携载光敏剂和免疫检查点阻断剂的,尺寸在纳米范围的药物剂型。该纳米制剂经静脉注射,能够同时输送光敏剂和免疫检查点阻断剂至肿瘤部位,发挥光动力治疗和免疫治疗作用。该纳米药物制剂与常规给药系统相比,能够提高光敏剂和/或免疫检查点阻断剂到达肿瘤部位的量,和/或实现肿瘤中药物的定位释放,在增强治疗效果的同时,降低全身性毒副作用。
[0009] 更具体的,本发明的纳米制剂,是由光敏剂、免疫检查点阻断剂和辅料组成的粒径在纳米范围的药物剂型;
[0010] 该纳米制剂可通过将光敏剂和免疫检查点阻断剂与辅料溶液混合,以搅拌的方法制得。该纳米制剂中的光敏剂为含有卟啉环结构的光敏剂,可以是间-四(羟基苯基)卟啉、5,10,15,20-四(4-苯磺酸钠)-21H,23H-卟啉、原卟啉IX、5,10,15,20-四(1-4-甲基吡啶基)卟啉
甲苯磺酸盐、二氢卟吩e6、苯并卟啉衍
生物单环酸A、叶绿素、脱镁叶绿酸盐A,以及这些化合物的盐的形式;
[0011] 本发明中,该纳米制剂制成脂质体,其中脂质体内部
水相中包载免疫检查点阻断剂,脂质双分子层中包载光敏剂。
[0012] 本发明中,该纳米制剂中的免疫检查点阻断剂是单克隆抗体,该单克隆抗体是属于免疫球蛋白G(IgG)分子,该单克隆抗体可以是不同种属来源的IgG,可以是人源的、鼠源的等等;
[0013] 具体的,所述的点阻断剂的单克隆抗体可以是抗细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)抗体、抗程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)抗体、抗程序性死亡配体1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)抗体、抗CD39抗体、抗CD73抗体中的一种或者几种;
[0014] 所述的查点阻断剂的单克隆抗体也可以是其它IgG分子。
[0015] 本发明中,该纳米制剂中的辅料是聚乙烯吡咯烷
酮,聚乙烯吡咯烷酮的分子量范围在5000至50000Da。
[0016] 本发明中,研究显示,具有卟啉环结构的光敏剂分子通过分子间疏水作用能够与单克隆抗体(IgG)稳定结合,在溶液状态下,光敏剂、IgG、聚乙烯吡咯烷酮三者自组装成纳米复合物;具有卟啉环结构的光敏剂分子与IgG的亲和力显著高于其与血清
白蛋白的亲和力,因此,免疫检查点阻断剂IgG能够显著提高此类光敏剂在血中的
稳定性,提高光敏剂在血中的浓度,从而增加其在肿瘤组织的富集,增强光动力治疗效果。
[0017] 本发明中,在所述的光敏剂、抗体、聚乙烯吡咯烷酮自组装纳米复合物中,光敏剂与抗体的
质量比范围在1:0.1到1:5之间;光敏剂与聚乙烯吡咯烷酮的质量比范围在1:0.01到1:100之间。
[0018] 在所述的光敏剂、抗体、聚乙烯吡咯烷酮自组装纳米复合物的粒径在10nm到200nm之间。
[0019] 本发明所涉及的纳米制剂也可以是光控温敏脂质体,该光控温敏脂质体含有具有卟啉环结构的光敏剂和二棕榈酰磷脂酰胆
碱热敏材料,利用具有卟啉环结构的光敏剂的光热转化特性,通过808nm激光在肿瘤部位照射,脂质体中的光敏剂吸收光能转化为
热能,当其局部
温度高于二棕榈酰磷脂酰胆碱的相转变温度(41℃)时,脂质体中所包载的抗体被释放,实现免疫检查点的阻断;光敏剂被肿瘤细胞摄取后,经660nm激光照射实现对肿瘤细胞的光动力治疗,该脂质体具有在肿瘤内可光
控释放药物的特性。
[0020] 本发明中,通过脂质体的制备方法将脂质体内部水相中包载免疫检查点阻断剂抗体(IgG),脂质双分子层中包载光敏剂,利用脂质体在血中的长循环作用,及其在肿瘤组织中的增加穿透与滞留(Enhanced Permeability and Retention,EPR)效应,提高光敏剂和抗体在肿瘤中的富集。
[0021] 本发明中,脂质体所包载的光敏剂为含有卟啉环结构的光敏剂,可以是间-四(羟基苯基)卟啉、5,10,15,20-四(4-苯磺酸钠)-21H,23H-卟啉、原卟啉IX、5,10,15,20-四(1-4-甲基吡啶基)卟啉甲苯磺酸盐、二氢卟吩e6、苯并卟啉衍生物单环酸A、叶绿素、脱镁叶绿酸盐A,以及这些化合物的盐的形式;
[0022] 脂质体所包载的免疫检查点阻断剂抗体(IgG)可以是抗细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)抗体、抗程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)抗体、抗程序性死亡配体1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)抗体、抗CD39抗体、抗CD73抗体中的一种或者几种;
[0023] 脂质体所包载的免疫检查点阻断剂抗体(IgG)可以是其它IgG分子.
[0024] 本发明中,采用乳化
薄膜分散法、反相
蒸发法、二次乳化法制备脂质体;其中,[0025] 薄膜分散法:将磷脂、胆固醇、
聚乙二醇化磷脂以及光敏剂充分溶解混匀在
有机溶剂(一般为氯仿或氯仿:甲醇混合溶液)中,逐步减压蒸发直至
有机溶剂彻底挥干,在瓶底处得到一层干燥的磷脂膜,加入适量体积的含有抗体的缓冲盐(一般为
磷酸缓冲液)水化,即得脂质体,对得到的脂质体采取超声、微射流、高压均质或者薄膜挤出等方法,制备符合粒径要求的脂质体;
[0026] 反相蒸发法:将磷脂、胆固醇、聚乙二醇化磷脂以及光敏剂充分溶解在与水不混溶的有机溶剂(通常为乙醚、氯仿)中,与含有抗体的缓冲盐水相(通常为
磷酸盐缓冲液)充分混合,利用超声和均质等方法使其形成油包水乳剂,置于圆底烧瓶中逐步减压蒸发挥去有机溶剂,得到凝胶态物质,加入缓冲液充分震荡即可得到脂质体;
[0027] 二次乳化法:利用与反相蒸发法相似的方法将第一水相和油混合制得油包水乳剂,将此乳剂加入第二水相中,即形成水包油包水型的复乳,减压蒸发,除去有机溶剂,即得脂质体;
[0028] 上述脂质体中也可以加入胆固醇和/或其它的磷脂成分,可以是二硬脂酰磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂、卵磷脂、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂的一种或者几种;
[0029] 上述脂质体中的聚乙二醇化磷脂是聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰
乙醇胺。其中,聚乙二醇分子量范围为1000至6000之间。聚乙二醇化磷脂的作用是在脂质体的表面提供亲水性高分子链聚乙二醇(PEG)。该聚乙二醇通常是单甲氧基聚乙二醇,经过PEG表面修饰的脂质体,可以减少
血浆蛋白
吸附,避免单核吞噬系统的吞噬,起到“隐形”作用,显著延长其血浆
半衰期,从而增加其到达肿瘤部位的机会,提高肿瘤内递药的可能性。
[0030] 本发明提供了一种新型的用于肿瘤光动力治疗联合免疫治疗的纳米制剂,由光敏剂、免疫检查点阻断剂和辅料组成的粒径在纳米范围的药物剂型。与常规给药系统和给药方法相比,制备的纳米制剂能提高光敏剂和/或免疫检查点阻断剂到达肿瘤部位的量,和/或实现肿瘤中药物的定位释放,在增强治疗效果的同时,降低全身性毒副作用。
附图说明
[0031] 图1.小鼠尾静脉注射αPD-L1-Ce6-PVP纳米或Ce6-PVP溶液后血中Ce6-时间曲线,%ID/mL,为每毫升血中Ce6占注射剂量的百分率,*p<0.05,n=3。
[0032] 图2.荷GL261脑胶质瘤小鼠尾静脉注射αPD-L1-Ce6-PVP纳米或Ce6-PVP溶液1h后各组织中的
荧光分布,%ID,为单位面积的各组织脏器中Ce6占注射剂量的百分率,*p<0.05,n=3。
具体实施方式
[0034] 以大鼠抗小鼠PD-L1单克隆抗体(αPD-L1)、二氢卟吩e6(Ce6)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为例,制备自组装纳米复合物,阐述该纳米复合物的
处方工艺、制备过程及其肿瘤递药的特性;
[0035] 1)处方和制备工艺
[0036] 配制含PVP(MW=10000Da)浓度为6.7mg/mL的磷酸缓冲液(0.01M,pH=7.4)。量取此溶液15μL(含PVP 0.1mg),在500rpm磁力搅拌下,逐滴加入到60μL含有0.2mgαPD-L1的磷酸缓冲液(0.01M,pH=7.4)中,继续搅拌5min。称量4mg Ce6,将其溶解在1mL的0.1%NaOH溶液中,吸取25μL该Ce6溶液逐滴加入上述αPD-L1与PVP的混合溶液中,继续搅拌5min,混合均匀后即得αPD-L1-Ce6-PVP纳米溶液。以磷酸缓冲液(0.01M,pH=7.4)替代上述含αPD-L1的磷酸缓冲液,制得Ce6-PVP溶液作为实验对照组;
[0037] 粒径分布:通过透射
电子显微镜观察,αPD-L1-Ce6-PVP纳米粒的粒径在30nm左右;
[0038] 2)Ce6、Ce6+PVP与αPD-L1、人血清白蛋白(HSA)、小鼠血清白蛋白(MSA)的动力学分析
[0039] 将蛋白与CM5芯片的偶联,采用生物大分子相互作用仪(Biacore T200)进行化合物Ce6、Ce6与PVP(1:1,w/w)混合物与αPD-L1、HSA、MSA蛋白的动力学分析。溶液体系为HBS-EP+缓冲液,PH=7.4;
[0040] 结果显示,Ce6与αPD-L1的亲和力值(KD)为6.096×10-8M,Ce6与MSA的亲和力值(KD)为1.617×10-6M。Ce6与HSA的亲和力值(KD)为2.118×10-6M,Ce6与αPD-L1的亲和力是其与MSA的26.5倍;是其与HSA的34.7倍,在Ce6与PVP(1:1,w/w)混合的情况下,Ce6与αPD-L1的亲和力值(KD)为7.002×10-8M,证实制剂中的PVP不显著影响Ce6与αPD-L1的结合;上述亲和力实验结果说明,Ce6与αPD-L1具有天然的强亲和力,能够自组装成纳米溶液。它们之间的亲和力高于Ce6与血清白蛋白的亲和力,αPD-L1能够起到在血中稳定Ce6的作用;
[0041] 3)αPD-L1-Ce6-PVP纳米与Ce6-PVP溶液静脉注射后在小鼠体内药动学的比较[0042] C57BL/6小鼠尾静脉注射αPD-L1-Ce6-PVP纳米(含0.2mgαPD-L1和0.1mg Ce6)或Ce6-PVP溶液(0.1mg Ce6),分别于给药后0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h尾静脉取血20μL,置于塑料离心管中,进行
近红外光学成像,定量分析血中荧光强度,以给药前空白血为对照组,计算血中的药物浓度;
[0043] 结果显示,αPD-L1-Ce6-PVP纳米能够提高Ce6在血中的稳定性,增加血中浓度,图1表明了C57BL/6小鼠尾静脉注射αPD-L1-Ce6-PVP纳米后0.5h到4h之间,血中荧光强度显著高于Ce6-PVP溶液组,例如,在注射后的1h,αPD-L1-Ce6-PVP纳米组的血中Ce6浓度是Ce6-PVP溶液组1.64倍;
[0044] 4)αPD-L1-Ce6-PVP纳米与Ce6-PVP溶液静脉注射1h后,在荷脑胶质瘤小鼠体内生物分布的比较
[0045] C57BL/6小鼠颅内注射5×105个GL261脑胶质瘤细胞(5μL),13天后颅内原位脑胶质瘤模型建立,尾静脉注射αPD-L1-Ce6-PVP纳米(含0.2mgαPD-L1和0.1mg Ce6)或Ce6-PVP溶液(0.1mg Ce6),于给药后的1h,尾静脉取血20μL,后处死,分离给组织脏器,进行近红外光学成像,定量分析各组织脏器中的荧光强度,计算其在各组织脏器中的荧光强度;
[0046] 结果如图2所示,在注射后的1h,αPD-L1-Ce6-PVP纳米组的脑肿瘤中Ce6荧光强度是Ce6-PVP溶液组1.85倍;
[0047] 实验结果证实,αPD-L1、Ce6、PVP的三者经自组装形成纳米复合物后,与Ce6、PVP的两者物理组合物相比较,能提高血中Ce6的稳定性增加其在血中的有效浓度,提高其在肿瘤中的浓度。
[0048] 实施例2
[0049] 以大鼠血清IgG、Ce6、PVP为例,制备自组装纳米复合物,阐述该纳米复合物的处方工艺、制备过程及其肿瘤递药的特性。
[0050] 以大鼠血清IgG代替αPD-L1,采用实施例1制备工艺,制得IgG-Ce6-PVP纳米溶液,透射电子显微镜观察,粒径在30nm左右,结合动力学实验测得Ce6与大鼠血清IgG的亲和力值(KD)为7.394×10-8M,小鼠尾静脉注射后的1h,IgG-Ce6-PVP纳米组的血中Ce6浓度是Ce6-PVP溶液组1.68倍;IgG-Ce6-PVP纳米组的脑肿瘤中Ce6荧光强度是Ce6-PVP溶液组1.71倍;
[0051] 实验结果证实,大鼠IgG、Ce6、PVP的三者经自组装形成纳米复合物后,Ce6与IgG具有其与αPD-L1相似的高亲和力,并同样能够提高血中Ce6的稳定性增加其在血中的有效浓度,提高其在肿瘤中的浓度。
[0052] 实施例3
[0053] 以人源化抗CTLA-4单克隆抗体IgG(αCTLA-4)、脱镁叶绿酸盐A(PheoA)、PVP为例,制备自组装纳米复合物,阐述该纳米复合物的处方工艺、制备过程及其肿瘤递药的特性。
[0054] 配制含PVP(MW=10000Da)浓度为6.7mg/mL的磷酸缓冲液(0.01M,pH=7.4)。量取此溶液15μL(含PVP 0.1mg),在500rpm磁力搅拌下,逐滴加入到60μL含有0.2mgαCTLA-4的磷酸缓冲液(0.01M,pH=7.4)中,继续搅拌5min。称量4mg脱镁叶绿酸盐A,将其溶解在1mL的0.05%NaOH溶液中,吸取50μL该脱镁叶绿酸盐A溶液逐滴加入上述αCTLA-4与PVP的混合溶液中,继续搅拌5min,混合均匀后即得αCTLA-4-PheoA-PVP纳米溶液,以磷酸缓冲液(0.01M,pH=7.4)替代上述含αCTLA-4的磷酸缓冲液,制得PheoA-PVP溶液作为实验对照组;
[0055] 通过透射电子显微镜观察,αCTLA-4-PheoA-PVP纳米粒的粒径在45nm左右,小鼠尾静脉注射后的1h,αCTLA-4-PheoA-PVP纳米组的血中PheoA浓度是PheoA-PVP溶液组2.34倍;αCTLA-4-PheoA-PVP纳米组在BALB/c小鼠荷4T1
乳腺癌原位肿瘤中PheoA荧光强度是PheoA-PVP溶液组2.51倍;
[0056] 实验结果证实,人源化抗CTLA-4单克隆抗体IgG、PheoA、PVP的三者经自组装形成纳米复合物后,人源化抗CTLA-4单克隆抗体IgG能够提高血中PheoA的稳定性增加其在血中的有效浓度,提高其在肿瘤中的浓度;
[0057] 上述实施例1,2和3的结果证实,具有IgG分子结构的单克隆抗体的免疫检查点阻断剂对含卟啉环结构的光敏剂分子具有强亲和力,能够提高血中的稳定性以及肿瘤中光敏剂的浓度。
[0058] 实施例4
[0059] 以大鼠抗小鼠PD-L1单克隆抗体IgG(αPDL-1)、仓鼠抗小鼠CTLA-4单克隆抗体IgG(αCTLA-4)、脱镁叶绿酸盐A(PheoA)为例,制备载有αPDL-1、αCTLA-4与PheoA的脂质体(αPD-L1/αCTLA-4-PheoA),阐述该脂质体的处方工艺、制备过程及其肿瘤递药的特性。
[0060] 按照摩尔比称取以下基本处方中各材料:二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)/胆固醇/PheoA/聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)(55:35:5:5),采用薄膜水化结合挤出法制备αPD-L1/αCTLA-4-PheoA脂质体,步骤如下:将上述
纳米材料加入氯仿使其溶解,置于茄形瓶中减压
旋转蒸发除去氯仿,将αPD-L1和αCTLA-4
超滤浓缩至含这两种单抗分别为10mg/mL的PBS溶液,将此溶液1mL加入茄形瓶中,4℃水化2天,期间漩涡振荡分散,将载药脂质水化液反复
挤压通过100nm核孔膜,再洗脱通过Sepharose CL-4B凝胶柱去除游离的抗体,即得载药脂质体;
[0061] 采用薄膜水化结合挤出法制备αPD-L1/αCTLA-4-PheoA脂质体,透射电镜下观察纳米粒为多泡囊状结构,平均粒径为140nm。αPD-L1和αCTLA-4的包封率分别为18.4±3.4%和19.1±1.6%;
[0062] 在808nm激光作用下,经0.5W/cm2照射5min后,溶液温度达到热敏纳米材料DPPC的相转变温度,包载的抗体αPD-L1被释放95%以上,未经808nm激光照射,包载的抗体αPD-L1被释放小于5%,该纳米粒在660nm激光作用下产生单线态氧,808nm激光(0.5W/cm2)照射5min对其产生单线态氧的能力几乎没有影响;
[0063] 静脉注射αPD-L1/αCTLA-4-PheoA脂质体6h后,BALB/c小鼠荷4T1乳腺癌原位肿瘤中的PheoA荧光强度是单纯PheoA溶液剂组的2.54倍;
[0064] 静脉注射IRDye800CW标记αPD-L1/αCTLA-4-PheoA脂质体6h后,BALB/c小鼠荷4T1乳腺癌原位肿瘤中的IRDye800CW标记αPD-L1荧光强度是单纯IRDye800CW标记αPD-L1溶液剂组的2.03倍;
[0065] 荷瘤鼠静脉给予该载药纳米粒6h后接受808nm激光(0.5W/cm2)照射3min,肿瘤平均温度达到~42℃,实现光控释放抗体的温度要求。
[0066] 实施例5
[0067] 以人源化抗人PD-1单克隆抗体IgG(αPD-1)、原卟啉IX(PpIX)为例,制备载有αPD-1与原卟啉IX的脂质体(αPD-1-PpIX),阐述该脂质体的处方工艺、制备过程及其肿瘤递药的特性;
[0068] 采用反相蒸发法,将DPPC 2.8mg、胆固醇0.93mg、聚乙二醇化磷脂(DSPE-PEG2000,0.77mg)以及光敏剂PpIX 0.2mg充分溶解在1mL氯仿中,与含有αPD-1抗体(0.5mg)的磷酸盐缓冲液0.33mL充分混合,利用超声方法使其形成油包水乳剂,置于圆底烧瓶中逐步减压蒸发挥去有机溶剂,得到凝胶态物质,加入缓冲液充分震荡;将载药脂质水化液反复挤压通过
100nm核孔膜,再洗脱通过Sepharose CL-4B凝胶柱去除游离的抗体,即得αPD-1-PpIX脂质体;
[0069] 透射电镜下观察纳米粒为多泡囊状结构,平均粒径为130nm,αPD-1的包封率为55.3±6.7%,在808nm激光作用下,经0.5W/cm2照射5min后,包载的抗体αPD-1被释放95%以上,该纳米粒在660nm激光作用下产生单线态氧,808nm激光(0.5W/cm2)照射5min对其产生单线态氧的能力几乎没有影响;
[0070] 静脉注射αPD-1-PpIX脂质体6h后,BALB/c小鼠荷4T1乳腺癌原位肿瘤中的PpIX荧光强度是单纯PpIX溶液剂组的3.12倍;
[0071] 静脉注射IRDye800CW标记αPD-1-PpIX脂质体6h后,BALB/c小鼠荷4T1乳腺癌原位肿瘤中的IRDye800CW标记αPD-1荧光强度是单纯IRDye800CW标记αPD-1溶液剂组的2.34倍;
[0072] 荷瘤鼠静脉给予该载药纳米粒6h后接受808nm激光(0.5W/cm2)照射3min,肿瘤平均温度达到~42℃,实现光控释放抗体的温度要求。
[0073] 本发明通过以上描述和实施例进行说明,以上描述为非限制性的,并不限制本发明的
权利要求范围。