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尿道狭窄治疗剂和尿道狭窄治疗方法

阅读：427发布：2020-05-11

专利汇可以提供尿道狭窄治疗剂和尿道狭窄治疗方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明的目的在于，提供在尿道狭窄治疗中，通过低侵袭性的经尿道内窥镜的手术能够避免再狭窄的尿道狭窄治疗剂和尿道狭窄治疗方法。解决手段：本发明提供一种尿道狭窄治疗剂，其特征在于，至少含有水凝胶形成性高分子，10℃的储能弹性模量为50Pa以下且37℃的储能弹性模量为100Pa以上。本发明还提供一种尿道狭窄治疗方法，其至少包含将上述尿道狭窄治疗剂冷却至10℃以下的温度并将其注入利用经尿道内窥镜的手术进行了切开处置的尿道内表面，并使其在室温以上的温度留置于该尿道内表面的操作。，下面是尿道狭窄治疗剂和尿道狭窄治疗方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种尿道狭窄治疗剂，其特征在于，
至少含有水凝胶形成性高分子，所述尿道狭窄治疗剂在10℃的储能弹性模量为50Pa以下，且在37℃的储能弹性模量为100Pa以上。
2.根据权利要求1所述的尿道狭窄治疗剂，其特征在于，
所述尿道狭窄治疗剂含有动物细胞。
3.根据权利要求2所述的尿道狭窄治疗剂，其特征在于，
所述动物细胞为患者自身的口腔粘膜细胞。
4.一种尿道狭窄治疗方法，其特征在于，至少含有以下操作：
将权利要求1所述的尿道狭窄治疗剂冷却至10℃以下的温度，并将其注入至利用经尿道内窥镜的手术进行了切开处置的尿道内表面，并在室温以上的温度使其留置于该尿道内表面。

说明书全文

尿道狭窄治疗剂和尿道狭窄治疗方法

技术领域

[0001] 本发明涉及对于尿道狭窄症的治疗有用的治疗剂。本发明还涉及尿道狭窄症的治疗方法。

背景技术

[0002] 尿道狭窄症由于诸如针对前列腺肥大症和膀胱癌的尿道内窥镜手术的后遗症、交通事故和劳动作业中的事故的外伤、作为先天性尿道的疾病的尿道下裂等各种因素而产生。其是一种因受损、炎症导致的尿道粘膜的损伤，在修复该损伤的过程中，在尿道粘膜或包围尿道粘膜的尿道海绵体中发生疤痕化，使尿道变窄的疾病。

[0003] 作为尿道狭窄症的治疗方法，有外科性重建尿道的治疗方法，但侵袭性高，需要长期住院，因此，近年来，实施了低侵袭且利用简便的尿道扩张器具(Bougie)、球囊扩张导管、冷刀、激光等的经尿道内窥镜扩张手术(林田重昭、桐山啻夫、广中弘、吉川静，针对男子尿道狭窄症的内尿道切开术的经验，泌尿器官科纪要(1972)，18(8)：588-593)。技术文献
非专利文献

[0004] 非专利文献1：林田重昭、桐山啻夫、广中弘、吉川静，针对男子尿道狭窄症的内尿道切开术的经验，泌尿器官科纪要(1972)，18(8)：588-593

发明内容

发明要解决的课题

[0005] 然而，在上述现有的治疗法中，由于在发生了疤痕组织化的尿道内表面上重建上皮细胞的能力极低，因此存在复发尿道狭窄的问题。本发明的目的在于提供在尿道狭窄治疗中能够通过低侵袭性的经尿道内窥镜手术来避免再狭窄的尿道狭窄治疗剂及尿道狭窄治疗方法。用于解决课题的手段

[0006] 本发明人等发现：作为尿道狭窄症的治疗方法，通过在利用经尿道内窥镜手术中进行了切开处置后的尿道内表面上留置具有特定物性的水凝胶，能有效地促进切开处置部位的上皮化，从而有效地防止该部位因疤痕组织化而复发尿道狭窄，从而完成了本发明。

[0007] 进而，本发明人等发现，在上述水凝胶中含有动物细胞，对上述课题的解决是有效的。特别是发现动物细胞是患者自身的口腔粘膜细胞是有效的。

[0008] 即，本发明的课题通过一种尿道狭窄治疗剂来解决，该尿道狭窄治疗剂的特征在于，至少含有水凝胶形成性高分子，10℃温度条件下的储能弹性模量为50Pa以下，且37℃温度条件下的储能弹性模量为100Pa以上。

[0009] 本发明的课题还通过所述尿道狭窄治疗剂来解决，其特征在于，所述尿道狭窄治疗剂包含动物细胞。

[0010] 另外，本发明的课题还通过尿道狭窄治疗剂来解决，其特征在于，所述动物细胞为患者自身的口腔粘膜细胞。

[0011] 本发明的课题还通过尿道狭窄治疗方法解决，所述尿道狭窄治疗方法的特征在于，至少含有以下操作：将以至少含有水凝胶形成性高分子，10℃温度条件下的储能弹性模量为50Pa以下且37℃温度条件下的储能弹性模量为100Pa以上的为特征的尿道狭窄治疗剂冷却至10℃以下的温度，并将其注入至利用经尿道内窥镜的手术进行了切开处置的尿道内表面上，并在室温以上的温度使其留置于该尿道内表面上。发明效果

[0012] 如以上说明的那样，根据本发明，通过在经尿道内窥镜手术中切开处置后的尿道内表面上留置具有特定物性的水凝胶，能够促进切开处置部位的上皮化，能够有效地防止该部位因疤痕组织化而复发尿道狭窄。

[0013] 进而，通过该水凝胶含有动物细胞(特别是患者自身的口腔粘膜细胞)，可进一步促进尿道内表面的切开处置部位的上皮化。

具体实施方式

[0014] 以下，对本发明的内容详细地进行说明。(水凝胶形成性的高分子)
本发明的“水凝胶形成性高分子”是指，具有能够热可逆地生成交联(crosslinking)结构或网络结构，并基于该结构，热可逆地形成在其内部保持水等分散液体的水凝胶的性质的高分子。另外，“水凝胶”是指包含由高分子构成的交联或网络结构及在该结构中被支撑或保持的水的凝胶。

[0015] (储能弹性模量)在本发明中，水凝胶的储能弹性模量的测定可以通过文献(H.Yoshioka等，Journal of Macromolecular Science，A31(1)，113(1994))中记载的方法来进行。即，在规定温度(10℃、25℃或37℃)下测定观测频率1Hz下的试样的动态弹性模量，再求出该试样的储能弹性模量(G′、弹性项)。在该测定时，可以适宜地采用下述的测定条件。

[0016] <动态-损失弹性模量的测定条件>测量设备(商品名)：应力控制式流变仪AR500，TA Instruments公司制
试样溶液的量：约0.8g
测定用单元的形状、尺寸：亚克力制平行圆盘(直径4.0cm)、间隙600μm
测定频率：1Hz
适用应力：线性区域内。

[0017] 本发明的尿道狭窄治疗剂的储能弹性模量在10℃为50Pa以下，优选为30Pa以下(特别优选10Pa以下)，并且优选的是，其储能弹性模量在37℃为100Pa以上，优选为200Pa以上(特别优选300Pa以上)。

[0018] 本发明的尿道狭窄治疗剂在10℃以下的低温下注入尿道狭窄治疗部位，以体温将尿道狭窄治疗剂留置于尿道狭窄治疗部位。若尿道狭窄治疗剂在10℃的储能弹性模量超过50Pa，则其硬度过大，经由导管注入变得困难。

[0019] 另一方面，本发明的尿道狭窄治疗剂在37℃的储能弹性模量低于100Pa的情况下，其强度不足，难以长时间留置于尿道狭窄治疗部位。

[0020] 进而，在男性患者的情况下，尿道狭窄治疗部位大多位于阴茎部中，由于露出到体外，因此容易受到外界气温的影响。本发明的“水凝胶形成性高分子”水溶液的室温(25℃)下的储能弹性模量低于100Pa的情况下，由于外部气温的降低而易于发生流动化，因此动物细胞对于尿道狭窄治疗部位的留置变得不完全。其结果，在疤痕组织化的尿道内表面上再建上皮细胞的能力低，因此存在再发尿道狭窄的问题。因此，优选的是，本发明的尿道狭窄治疗剂的储能弹性模量在25℃为100Pa以上，优选为200Pa以上(特别优选300Pa以上)。

[0021] 赋予本发明的尿道狭窄治疗剂如上所述的适宜的储能弹性模量的“水凝胶形成性高分子”，可根据上述筛选方法(储能弹性模量测定法)容易地从如后所述的具体化合物中选择。

[0022] 作为该水凝胶在更低的温度下可逆地显示流动性的高分子的具体例，例如已知以聚环氧丙烷与聚环氧乙烷的嵌段共聚物等为代表的聚环氧烷嵌段共聚物；甲基纤维素，羟丙基纤维素等醚化纤维素；壳聚糖衍生物(K，R，Holme，et al.Macromolecules，24，3828(1991))等。

[0023] (适合的水凝胶形成性高分子)可以适合用作本发明的“水凝胶形成性高分子”的、在交联形成中利用疏水键的水凝胶形成性高分子，优选为由具有浊点的多个嵌段与亲水性的嵌段键合而成。

[0024] 该亲水性的嵌段优选为了以更低的温度使该水凝胶成为水溶性而存在，另外，具有浊点的多个嵌段优选为了使水凝胶以更高的温度变化为凝胶状态而存在。换言之，具有浊点的嵌段在低于该浊点的温度下溶解于水，在高于该浊点的温度下变为在水中不溶性，因此在高于浊点的温度下，该嵌段作为用于形成凝胶的疏水键构成的交联点发挥作用。

[0025] 本发明中使用的水凝胶不仅利用了疏水性键随着温度上升而变强的性质，而且还利用了其变化相对于温度可逆的性质。从在1分子内形成多个交联点、形成稳定性优异的凝胶的观点出发，优选“水凝胶形成性的高分子”具有多个“具有浊点的嵌段”。

[0026] 另一方面，如上所述，上述“水凝胶形成性的高分子”中的亲水性嵌段具有使该“水凝胶形成性的高分子”在更低的温度下水溶性发生变化的功能，并且具有防止在高于上述转变温度的温度下疏水性键合力增大而使上述水凝胶凝聚沉淀的功能、同时具有形成含水凝胶的状态的功能。

[0027] 而且，本发明中使用的“水凝胶形成性的高分子”优选在生物体内可被分解、吸收。即，优选本发明的“水凝胶形成性高分子”在生物体内通过水解反应、酶反应而被分解，成为对生物体无害的低分子量体而被吸收、排泄。

[0028] 本发明的“水凝胶形成性高分子”为具有浊点的多个嵌段与亲水性的嵌段键合而成的情况下，优选的是，具有浊点的嵌段与亲水性的嵌段中的至少任一个，优选两者在生物体内可被分解、吸收。

[0029] (具有浊点的多个嵌段)作为具有浊点的嵌段，优选为对水的溶解度-温度系数显示负的高分子的嵌段，更具体而言，优选选自聚环氧丙烷、环氧丙烷与其他环氧烷的共聚物、聚N-取代丙烯酰胺衍生物、聚N-取代甲基丙烯酰胺衍生物、N-取代丙烯酰胺衍生物与N-取代甲基丙烯酰胺衍生物的共聚物、聚乙烯基甲醚、聚乙烯醇部分乙酰化物中的高分子。

[0030] 为了使具有浊点的嵌段在生物体内可被分解、吸收，将具有浊点的嵌段设为包含疏水性氨基酸和亲水性氨基酸的多肽是有效的。或者，也可以将聚乳酸、聚乙醇酸等聚酯型生物降解性聚合物作为在生物体内可被分解、吸收的具有浊点的嵌段利用。

[0031] 从使本发明中使用的高分子(具有浊点的多个嵌段与亲水性的嵌段键合的化合物)的储能弹性模量在规定温度下成为所希望的值的观点出发，优选上述的高分子(具有浊点的嵌段)的浊点高于4℃且为40℃以下。

[0032] 在此，浊点的测定能够通过如下方法来进行：例如将上述高分子(具有浊点的嵌段)的约1质量％的水溶液冷却而制成透明的均匀溶液后，逐渐升温(升温速度约1℃/min)，将该溶液最初出现白浊的点作为浊点。

[0033] 以下列举本发明中可使用的聚N-取代丙烯酰胺衍生物、聚N-取代甲基丙烯酰胺衍生物的具体例。聚-N-丙烯酰基哌啶；聚-N-正丙基甲基丙烯酰胺；聚-N-异丙基丙烯酰胺；聚-N,N-二乙基丙烯酰胺；聚-N-异丙基甲基丙烯酰胺；聚-N-环丙基丙烯酰胺；聚-N-丙烯酰基四氢吡咯；
聚-N,N-乙基甲基丙烯酰胺；聚-N-环丙基甲基丙烯酰胺；聚-N-乙基丙烯酰胺。
上述的高分子可以是单独聚合物(均聚物)，也可以是构成上述聚合物的单体与其他单体的共聚物。作为这样的构成共聚物的其他单体，可以使用亲水性单体、疏水性单体中的任意种。一般而言，与亲水性单体进行共聚时，生成物的浊点上升，与疏水性单体发生共聚时，生成物的浊点下降。因此，通过选择这些用来进行共聚的单体，也能够得到具有所需的浊点(例如高于4℃且40℃以下的浊点)的高分子。

[0034] (亲水性单体)作为上述亲水性单体，可举出N-乙烯基吡咯烷酮、乙烯基吡啶、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸羟甲酯、丙烯酸羟甲酯、具有酸性基团的丙烯酸、甲基丙烯酸和它们的盐、乙烯基磺酸、苯乙烯磺酸等、以及具有碱性基团的甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯、甲基丙烯酸N,N-二乙基氨基乙酯、N,N-二甲基氨基丙基丙烯酰胺和它们的盐等，但并不限于这些。

[0035] (疏水性单体)另一方面，作为上述疏水性单体，可举出丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯、缩水甘油基甲基丙烯酸酯等丙烯酸酯衍生物和甲基丙烯酸酯衍生物、N-正丁基甲基丙烯酰胺等N-取代烷基甲基丙烯酰胺衍生物、氯乙烯、丙烯腈、苯乙烯、乙酸乙烯酯等，但并不限于这些。

[0036] (亲水性的嵌段)另一方面，作为应该与上述具有浊点的嵌段进行键合的亲水性的嵌段，具体地可举出，甲基纤维素、葡聚糖(Dextran)、聚环氧乙烷、聚乙烯醇、聚N-乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯基吡啶、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚N-甲基丙烯酰胺、聚丙烯酸羟甲酯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚乙烯基磺酸、聚苯乙烯磺酸和它们的盐；聚甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯、聚甲基丙烯酸N,N-二乙氨基乙酯、聚N,N-二甲氨基丙基丙烯酰胺和它们的盐等。

[0037] 另外，亲水性的嵌段期望在生物体内可被分解、代谢、排泄，优选使用白蛋白、明胶等蛋白质、透明质酸、肝素、甲壳素、壳聚糖等多糖类等亲水性生物体高分子。

[0038] 将具有浊点的嵌段与上述亲水性的嵌段键合的方法没有特别限制，例如，可以通过向上述任一个嵌段中导入聚合性官能团(例如丙烯酰基)，使其与提供另一个嵌段的单体共聚而进行。另外，具有浊点的嵌段与上述亲水性的嵌段的键合物也可以通过提供具有浊点的嵌段的单体与提供亲水性的嵌段的单体的嵌段共聚而得到。另外，具有浊点的嵌段与亲水性的嵌段的键合也可以预先在两者中导入反应活性的官能团(例如羟基、氨基、羧基、异氰酸酯基等)，使两者通过化学反应而键合来进行。此时，通常在亲水性的嵌段中导入多个反应活性的官能团。另外，具有浊点的聚环氧丙烷与亲水性的嵌段的键合，例如，可以通过阴离子聚合或阳离子聚合，使环氧丙烷与构成“其他亲水性嵌段”的单体(例如环氧乙烷)反复逐次聚合，由此能够得到聚环氧丙烷与“亲水性嵌段”(例如聚环氧乙烷)键合而成的嵌段共聚物。这样的嵌段共聚物可以通过将聚合性基团(例如丙烯酰基)导入聚环氧丙烷的末端后，使构成亲水性嵌段的单体与其共聚而得到。进而，通过在亲水性的嵌段中导入能够与聚环氧丙烷末端的官能团(例如羟基)进行键合反应的官能团，使两者反应，也可以得到本发明中使用的高分子。此外，通过使在聚丙二醇的两端键合聚乙二醇而得的Pluronic F-127(商品名，旭电化工业株式会社制)等材料连接，也能够得到本发明中使用的“水凝胶形成性的高分子”。

[0039] 包含该具有浊点的嵌段的实施方式下的本发明的高分子在低于浊点的温度下，存在于分子内的上述“具有浊点的嵌段”与亲水性的嵌段一起为水溶性，因此完全溶解于水，示出溶胶状态。但是，将该高分子的水溶液的温度加热至高于上述浊点的温度时，存在于分子内的“具有浊点的嵌段”成为疏水性，由于疏水性相互作用，在分别的分子间缔合。

[0040] 另一方面，亲水性的嵌段此时(加热至高于浊点的温度时)也是水溶性的，因此本发明的高分子，在水中生成以具有浊点的嵌段间的疏水性缔合部作为交联点而具有三维网络结构的水凝胶。将该水凝胶的温度再次冷却至低于分子内存在的“具有浊点的嵌段”的浊点的温度时，该具有浊点的嵌段成为水溶性，基于疏水性缔合的交联点被释放，水凝胶结构消失，本发明的“水凝胶形成性的高分子”再次变成完全的水溶液。由此，适宜的实施方式中的本发明的高分子的物性变化基于分子内存在的具有浊点的嵌段的在该浊点的可逆的亲水性、疏水性的变化，具有与温度变化对应的，完全的可逆性。

[0041] 根据本发明人等的研究，认为上述“水凝胶形成性的高分子”在水中的微妙的亲水性-疏水性的平衡有助于培养细胞时的细胞的稳定性。

[0042] (凝胶的溶解性)如上所述，本发明的水凝胶形成性高分子在体温(37℃)下实质上显示水不溶性，在冰冷下显示可逆的水可溶性。上述“实质上水不溶性”是指在37℃下溶于100mL水的上述高分子的量优选为5.0g以下(进一步优选为0.5g以下，特别优选0.1g以下)。

[0043] 另一方面，上述冰冷下“水可溶性”是指在10℃下溶解于100mL水的上述高分子的量优选为0.5g以上(进一步优选1.0g以上)。进而，“显示可逆的水可溶性”是指，即使在上述“水凝胶形成性的高分子”的水溶液暂时在37℃下成为“实质上水不溶性”的凝胶状态之后，在10℃下也显示上述的水可溶性。

[0044] 优选上述高分子的10％水溶液在5℃，显示10～3000厘泊(进一步优选50～1000厘泊)的粘度。这样的粘度优选在例如以下的测定条件下进行测定。粘度计：应力控制式流变仪(型号名：AR500、TA Instruments公司制造)
转子直径：60mm
转子形状：平行平板

[0045] 本发明的“水凝胶形成性高分子”的水溶液即使在37℃下浸渍于大量的水中，该凝胶也实质上不溶解。上述“水凝胶形成性的高分子”所形成的水凝胶的上述特性例如能够如下确认。即，将“水凝胶形成性高分子”0.15g在冰冷下溶解于1.35g蒸馏水中，制作10wt％的水溶液，将该水溶液注入直径为35mm的塑料培养皿中，在37℃下进行加湿，从而在该培养皿中形成厚度约1.5mm的凝胶后，测定包含该凝胶的培养皿整体的重量(f克)。接着，将含有该凝胶的培养皿整体在37℃下在250ml水中静置10小时后，测定含有该凝胶的培养皿整体的重量(g克)，评价有无凝胶从凝胶表面溶解。此时，在本发明的水凝胶形成性高分子中，上述凝胶的重量减少率、即(f-g)/f优选为5.0％以下，进一步优选为1.0％以下(特别优选0.1％以下)。

[0046] 本发明的“水凝胶形成性高分子”的水溶液在37℃下凝胶化后，即使在大量(体积比，凝胶的0.1～100倍左右)的水中浸渍，经过很长时间该凝胶也不会溶解。这样的本发明中使用的高分子的性质例如通过在该高分子内存在2个以上(多个)具有浊点的嵌段来实现。

[0047] 与之相对的是，本发明人等发现：使用在聚环氧丙烷的两端键合聚环氧乙烷而成的上述的Pluronic F-127制作了同样的凝胶的情况下，在数小时的静置后该凝胶完全溶解于水。

[0048] 从将非凝胶化时的细胞毒性尽可能抑制为低的水平的观点出发，优选使用能够以相对水的浓度、即{(高分子)/(高分子+水)}×100(％)计为20％以下(进一步优选为15％以下，特别优选为10％以下)的浓度发生凝胶化的“水凝胶形成性的高分子”。

[0049] 本发明中使用的“水凝胶形成性高分子”的分子量优选为3万以上3000万以下，更优选为10万以上1000万以下，进一步优选为50万以上500万以下。

[0050] 为了将本发明的尿道狭窄治疗剂的储能弹性模量调整到优选的范围，可以与如上述那样选择“水凝胶形成性的高分子”的种类相结合，还可通过调整尿道狭窄治疗剂中的“水凝胶形成性的高分子”的浓度来进行。通常，若提高“水凝胶形成性的高分子”的浓度，则本发明的尿道狭窄治疗剂的储能弹性模量增大，若降低该浓度，则本发明的尿道狭窄治疗剂的储能弹性模量减少。

[0051] (添加盐)本发明的尿道狭窄治疗剂至少包含上述“水凝胶形成性的高分子”，为了具有接近生物体的体液的pH或渗透压，优选添加pH缓冲液或生理盐水等盐类。

[0052] (动物细胞)本发明的尿道狭窄治疗剂能够使动物细胞分散而使用。作为动物细胞，尿道粘膜上皮细胞是最优选的。为了采集的容易性和避免免疫排斥反应，优选利用自身口腔粘膜细胞。

[0053] 作为动物细胞，从免疫耐受性高的观点出发，也可以利用分化细胞以外的未分化细胞。作为未分化细胞的例子，可举出ES细胞、iPS细胞等多能干细胞、间充质干细胞。

[0054] 本发明的尿道狭窄治疗剂中，可以在即将将动物细胞作为尿道狭窄治疗剂使用之前混合，也可以预先使细胞分散到尿道狭窄治疗剂中，使细胞增殖之后应用于尿道狭窄部位。

[0055] 在上述细胞为未分化细胞的情况下，也可以在未分化的状态下增殖后，朝着粘膜上皮细胞的细胞谱系方向进行分化诱导。

[0056] (细胞因子)出于促进尿道狭窄部位的粘膜细胞上皮化的目的，本发明的尿道狭窄治疗剂中也可以含有各种细胞因子。由于细胞因子为水溶性，因此即使直接注入尿道狭窄部位也容易扩散，但是本发明的尿道狭窄治疗剂通过“水凝胶形成性的高分子”形成细密的高分子网络，因此抑制细胞因子的扩散。因此，由于能够在尿道狭窄部位周边以高浓度保持细胞因子，因此能够长时间维持细胞因子的效果。

[0057] 本发明中优选使用的细胞因子只要是促进尿道狭窄部位的粘膜细胞上皮化的细胞因子即可，可以没有特别限制地使用，但作为其作用，优选使用具有维持细胞的未分化、促进增殖、促进向着尿道粘膜上皮细胞谱系的分化诱导等作用的细胞因子。

[0058] (尿道狭窄治疗方法)本发明的尿道狭窄治疗剂通过留置于通过经尿道内窥镜手术进行了切开处置后的尿道内表面上而促进切开处置部位的上皮化，有效地防止由于该部位的疤痕组织化而复发尿道狭窄。

[0059] 通过通常的经尿道内窥镜切开术对患者进行尿道狭窄部位的切开，插入尿道导管后，经由与尿道导管不同的导管向尿道导管周围与尿道内表面切开部位之间注入冰冷的本发明的尿道狭窄治疗剂。本发明的尿道狭窄治疗剂被体温加热，立即凝胶化，以覆盖尿道内表面切开部位整体的方式被留置。当在术后约3周拔去尿道导管时，狭窄切开部位不会疤痕化而被粘膜上皮细胞覆盖，确保尿的良好流通。

[0060] 本发明的尿道狭窄治疗剂具有溶解于冰冷水的性质，因此在由于术后某种原因而想要除去本发明的尿道狭窄治疗剂时，能够用冰冷水容易地冲洗。实施例

[0061] 以下示出“水凝胶形成性的高分子”的制造例以及本发明的实施例，进一步具体地说明本发明，本发明的范围由权利要求书限定，不受以下实施例的限定。

[0062] 制造例1将聚环氧丙烷-聚环氧乙烷共聚物(环氧丙烷/环氧乙烷平均聚合度约60/180，旭电化工业株式会社制：Pluronic F-127)l0g溶解于干燥氯仿30ml中，在五氧化二磷共存下，加入六亚甲基二异氰酸酯0.13g，在沸点回流下使其反应6小时。将溶剂减压馏去后，用蒸馏水溶解残留物，使用截留分子量50万的超滤膜进行超滤，截留出高分子量聚合物和低分子量聚合物。将得到的水溶液冻结，得到F-127高聚合物和F-127低聚合物。

[0063] 将上述得到的F-127高聚合物(本发明的水凝胶形成性高分子，“水凝胶形成性的高分子”-1)1g在冰冷下溶解于9g的蒸馏水中，得到l0wt％的水溶液。使用应力控制式流变仪(AR500、TA Instruments公司制)以适用频率1Hz对该水溶液的储能弹性模量进行了测定，在10℃为4Pa，在25℃为1890Pa，在37℃为6660Pa。可逆地反复观测到此温度依存性储能弹性模量变化。另一方面，将上述F-127低聚合物在冰点下以l0wt％的浓度溶解于蒸馏水时，即使加热至60℃以上，也完全不发生凝胶化。

[0064] 制造例2相对于三羟甲基丙烷1摩尔，通过阳离子聚合加成环氧乙烷160摩尔，得到平均分子量约7000的聚环氧乙烷三醇。
将上述得到的聚环氧乙烷三醇100g溶解于蒸馏水1000ml后，在室温下缓慢加入高锰酸钾12g，直接放置约1小时，使其发生氧化反应。通过过滤除去固形物后，用氯仿提取生成物，减压馏去溶剂(氯仿)，得到聚环氧乙烷三羧基体90g。
将上述得到的聚环氧乙烷三羧基体l0g，与聚环氧丙烷二氨基体(环氧丙烷平均聚合度约65，美国Jefferson Chemical公司制，商品名：JEFFAMINE D-4000，浊点：约9℃)l0g，溶解于四氯化碳1000ml，加入二环己基碳二亚胺1.2g之后，在沸点回流下使其反应6小时。将反应液冷却，通过过滤除去固形物后，减压馏去溶剂(四氯化碳)，对残渣进行真空干燥，得到多个聚环氧丙烷和聚环氧乙烷键合而成的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-2)。将该高分子1g冰冷下溶解于19g的蒸馏水中，得到5wt％的水溶液。使用应力控制式流变仪(AR500、TA Instruments公司制)以适用频率1Hz对该水溶液的储能弹性模量进行了测定，在10℃为lPa，在25℃为550Pa，在37℃为3360Pa。可逆地反复观测到此温度依存性储能弹性模量变化。

[0065] 制造例3将N-异丙基丙烯酰胺(Eastman Kodak公司制)96g、N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺(国产化学株式会社制)17g和甲基丙烯酸正丁酯(关东化学株式会社制)7g溶解于氯仿4000ml中，氮气置换后，加入N,N≡-偶氮二异丁腈1.5g，在60℃使其进行6小时聚合。将反应液浓缩后，使其在二乙醚中再沉(再沉淀)。通过过滤回收固形物，然后进行真空干燥，得到78g的聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺-共-甲基丙烯酸正丁酯)。
在上述得到的聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺-共-甲基丙烯酸正丁酯)中，加入过量的异丙基胺，得到聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸正丁酯)。该聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸正丁酯)的水溶液的浊点为19℃。

[0066] 将上述的聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺-共-甲基丙烯酸正丁酯)l0g和两末端氨基化聚环氧乙烷(分子量6000，川研精细化学品株式会社制)5g溶解于氯仿1000ml中，在50℃使其进行3小时反应。冷却至室温后，加入异丙基胺1g，进行了1小时放置后，浓缩反应液，将残渣在二乙醚中沉淀。通过过滤回收固形物，然后进行真空干燥，得到多个聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸正丁酯)与聚环氧乙烷键合而成的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-3)。将该高分子1g在冰冷下溶解于9g的蒸馏水中，得到l0wt％的水溶液。使用应力控制式流变仪(AR500、TA Instruments公司制)以适用频率1Hz对该水溶液的储能弹性模量进行了测定，在10℃为lPa以下，在25℃为30Pa，在37℃为250Pa。可逆地反复观测到此温度依存性储能弹性模量变化。

[0067] 制造例4(灭菌方法)
将上述的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性高分子”-3)的2.0g放入EOG(环氧乙烷气体)灭菌袋(HogyMedical公司制，商品名：混合灭菌袋)中，用EOG灭菌装置(Easy Pack，井内盛荣堂制)将EOG填充到袋中，在室温下放置一昼夜。进而，在40℃下放置半天后，将EOG从袋中抽出，进行了通气。将袋放入真空干燥器(40℃)，一边逐渐通气一边放置半天，由此进行灭菌。
另行确认了通过该灭菌操作，高分子水溶液的储能弹性模量不变化。

[0068] 制造例5将N-异丙基丙烯酰胺71.0g和甲基丙烯酸正丁酯4.4g溶解于乙醇1117g中，在其中加入用水773g溶解聚乙二醇二甲基丙烯酸酯(PDE6000，日本油脂株式会社制)22.6g得到的水溶液，在氮气流下在70℃进行加湿。一边在氮气流下保持70℃一边加入N,N,N≡,N≡-四甲基乙二胺(TEMED)0.8ml和10％滤过硫酸铵(APS)水溶液8ml，使其进行30分钟机梓反应。进而，以30分钟的间隔4次添加TEMED O.8ml和10％APS水溶液8ml，使聚合反应完结。将反应液冷却至l0℃以下之后，加入10℃的冷却蒸馏水5L进行稀释，使用截留分子量10万的超滤膜在
10℃浓缩至2L。
在该浓缩液中加入冷却蒸馏水4L进行稀释，再次进行上述超滤浓缩操作。重复进行5次上述的稀释、超滤浓缩操作，去除分子量10万以下的物质。回收通过该超滤未被过滤的物质(超滤膜内残留的物质)进行冷冻干燥，得到分子量10万以上的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-5)72g。

[0069] 将上述得到的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-5)1g在冰冷下溶解于9g的蒸馏水，得到l0wt％的水溶液。使用应力控制式流变仪(AR500、TA Instruments公司制)以适用频率1Hz对该水溶液的储能弹性模量进行了测定，在10℃为lPa以下，在25℃为80Pa，在37℃为460Pa。可逆地反复观测到此温度依存性储能弹性模量变化。

[0070] 制造例6将N-异丙基丙烯酰胺42.0g和甲基丙烯酸正丁酯4.0g溶解于乙醇592g。在其中加入用水65.1g溶解了聚乙二醇二甲基丙烯酸酯(PDE6000，日本油脂株式会社制)11.5g得到的水溶液，在氮气流下加温至70℃。一边保持在氮气流下70℃一边加入N,N,N≡,N≡-四甲基乙二胺(TENED)0.4ml和10％过硫酸铵(APS)水溶液4ml并以30分钟的间隔反应。进而以30分钟的间隔4次添加TENED 0.4ml和10％APS水溶液4ml，使聚合反应完结。将反应液冷却至59C以下后，加入5℃的冷却蒸馏水5L进行了稀释，使用截留分子量10万的超滤膜在5℃浓缩至2L。
在该浓缩液中加入冷却蒸馏水4L进行稀释，再次进行上述超滤浓缩操作。在进一步重复进行5次上述的稀释、超滤浓缩操作，去除分子量10万以下的物质。回收通过该超滤未被过滤的物质(超滤膜内残留的物质)进行冷冻干燥，得到分子量10万以上的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-6)40g。
将上述得到的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-6)1g在冰冷下溶解于9g的蒸馏水，得到l0wt％的水溶液。使用应力控制式流变仪(AR500、TA Instruments公司制)以适用频率1Hz对该水溶液的储能弹性模量进行了测定，在10℃为
43Pa，在25℃为680Pa，在37℃为1310Pa。可逆地反复观测到此温度依存性储能弹性模量变化。

[0071] 制造例7将N-异丙基丙烯酰胺45.5g和甲基丙烯酸正丁酯0.56g溶解于乙醇592g中，在其中加入用水65.1g溶解聚乙二醇二甲基丙烯酸酯(PDE6000，日本油脂株式会社制)11.5g而得的水溶液，在氮气流下加温至70℃。一边保持氮气流下70℃，一边加入N,N,N≡,N≡-四甲基乙二胺(TENED)0.4ml和10％滤过硫酸铵(APS)水溶液4ml，进行30分钟搅拌反应。，进而以30分钟间隔4次添加TENED 4.0ml和10％APS水溶液4ml，使聚合反应完结。将反应液冷却至10℃以下后，加入10℃的冷却蒸馏水5L进行稀释，使用截留分子量10万的超滤膜在10℃浓缩至2L。
在该浓缩液中加入冷却蒸馏水4L进行稀释，再次进行上述超滤浓缩操作。进一步重复进行5次上述的稀释、超滤浓缩操作，去除分子量10万以下的物质。回收通过该超滤未被过滤的物质(超滤膜内残留的物质)进行冷冻干燥，得到分子量10万以上的本发明的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-7)22g。
将上述得到的水凝胶形成性高分子(“水凝胶形成性的高分子”-7)1g在冰冷下溶解于
9g的蒸馏水，得到l0wt％的水溶液。使用应力控制式流变仪(AR500、TA Instruments公司制)以适用频率1Hz对该水溶液的储能弹性模量进行了测定，在10℃为lPa以下，在25℃为lPa以下，在37℃为90Pa。可逆地反复观测到此温度依存性储能弹性模量变化。

[0072] 实施例1与制造例4同样地，对制造例6中得到的冷冻干燥水凝胶形成性高分子-6进行EOG灭菌。
在冰冷下，将EOG灭菌后的水凝胶形成性高分子-6以10wt％的浓度溶解于磷酸缓冲液中。采集男性尿道狭窄患者的口腔粘膜组织(2cmX1cm)，向胶原酶处理过的细胞中添加患者本人的血清(与细胞等量)，冰冷下分散于上述水凝胶形成性高分子-6的磷酸缓冲液。将该细胞分散液升温到37℃使其凝胶化，直接培养10天，使细胞数增殖到约10倍。对于患者，通过经尿道内窥镜切开术进行尿道狭窄部位的切开，插入尿道导管后，在尿道导管周围与尿道内表面切开部位之间注入冰冷的上述细胞培养后的本发明的尿道狭窄治疗剂。本发明的尿道狭窄治疗剂被体温加热而立即凝胶化，以覆盖尿道内表面切开部位整体的方式被留置。手术后3周将尿道导管拔去。狭窄切开部位没有疤痕化而被粘膜上皮细胞覆盖，确保尿的良好流通。对10名患者进行同样的治疗，所有患者均未确认到再狭窄。

[0073] 实施例2除了不添加男性尿道狭窄患者的口腔粘膜细胞和血清以外，对10名患者进行与实施例
1相同的治疗，结果，所有患者未确认到再狭窄，但在2例中确认到狭窄切开部位的疤痕化。

[0074] 实施例3除了使用制造例5中得到的冷冻干燥水凝胶形成性高分子-5代替制造例6中得到的冷冻干燥水凝胶形成性高分子-6之外，对10名患者进行与实施例2相同的治疗，结果在2例中确认到再狭窄。

[0075] 比较例1除了使用制造例7中得到的冷冻干燥水凝胶形成性高分子-7来代替制造例6中得到的冷冻干燥水凝胶形成性高分子-6以外，对10名患者进行与实施例1相同的治疗，结果所有患者均确认到狭窄切开部位的疤痕化。由于水凝胶形成性高分子-7在37℃的储能弹性模量低至小于100Pa，因此认为其不能作为本发明的尿道狭窄治疗剂发挥功能。

[0076] 比较例2实施例1中，在冰冷下将EOG灭菌后的冷冻干燥水凝胶形成性高分子-6以11wt％的浓度溶解于磷酸缓冲液中。使用应力控制式流变仪(AR500、TA Instruments公司制)以适用频率
1Hz测定该水溶液的储能弹性模量时，在10℃为75Pa。该溶液即使在冰冷下流动性也低，不能经由导管向尿道狭窄部位注入，不能作为本发明的尿道狭窄治疗剂发挥功能。

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