本发明首先涉及一种呈含有可生物降解聚合物或共聚物型赋形 剂或此类赋形剂混合物以及至少一种活性物质的微囊或植入物形式 的组合物，所述赋形剂或赋形剂混合物在氯仿中具有0.5dl/g至 1.6dl/g的特性粘度。本发明还涉及一种呈含有至少一种高分子量 的可生物降解聚合物或共聚物以及至少一种具有高比表面的水溶性 活性物质的微囊或植入物形式的组合物。所述组合物被用于在长达 三个月以上的延迟时间内持续释放活性物质。

上述组合物，特别是微囊，主要用于药剂学领域，但是也适用 于其他领域，尤其是农业化学，即植物保护的领域。

不论是常规药物产品如甾类、肽类或蛋白质类(参加如Boswell 的美国专利US 3,773,919)，抑或是用于植物保护的产品，将这些 活性成分以缓释组合物形式施用早已被公认为颇具价值。所述剂型 可以采用其中活性成分与可生物降解聚合物或共聚物如聚丙交酯/ 共聚乙交酯共聚物(PLGA)混合的微粒形式。

业已发现，特别是在寻求一种更恒定的在任何情况下均不间断 的释放模式时，需要较低分子量，即低粘度的PLGA型聚合物，这种 模式是指例如在欧洲专利EP 58 481中称作“单相”的释放模式。 就此可提及欧洲专利EP 21 234、EP 52 510和EP26 599；其中EP 21 234可参见其实施例8.B.2中公开的特性粘度为0.5dl/g的聚合物， EP 52 510中对粘度为0.38dl/g的处于六氟异丙醇(HFIP)中的共 聚物进行了体内试验，和EP26 599公开了例如粘度为0.12-0.20dl/g 的聚合物并且要求保护粘度为0.08-0.30dl/g的聚合物。上述专利 述及的聚合物被用作能够产生恒速释药的组合物。例如，专利EP26 599中含有节育药。

在此方面同样值得注意的是，于本专利申请的申请日，欧洲专 利58 481正处于异议程序之中，申请人已将其主权利要求限定于唯 一能够产生单相型释放的低粘度(低于0.3或0.5dl/g)聚合物。

此外，当需要更长期(如一个月以上)释药时，会出现更复杂的 问题，例如专利EP0 302 582中提供了一种解决方案，其中包括将 由粘度不同的聚合物构成的微囊混合在一起。

近期，本申请人发现某些高粘度聚合物适合于制备长效缓释组 合物。并且还发现，利用某些聚合物可以生产具有长时间单相释放 性能而且不存在无释放的起始阶段(静止期)的组合物。具体所采用 的聚合物在氯仿中的特性粘度适宜至少为0.5dl/g，并且更优选至 少为0.6或0.7dl/g。但总之，这些聚合物在氯仿中的特性粘度应 不超过1.6dl/g，并且可以低于1.4或1.2dl/g。所述聚合物优选为 其丙交酯/乙交酯配比在40/60-90/10，优选约为75/25的PLGA类 物质。

本发明的聚合物可以通过常规方式制备，具体可通过打开丙交 酯或乙交酯的环系来制备。在诸如美国专利US3,773,919中公开了 此类开环方法。

在本发明中，还可以采用具有不同较高粘度的聚合物的混合 物，但优选的组合物中只含有一种聚合物或共聚物。

所以，本发明首先涉及一种微囊或植入物形式的组合物，该组 合物含有可生物降解的、在氯仿中的特性粘度为0.5dl/g-1.6dl/g 的聚合物或共聚物型赋形剂或此类赋形剂混合物以及一种活性物质 或活性物质混合物，这些微囊或植入物可以在至少为1个月，优选 至少2个月，更优选至少为3个月的长时间内释放出活性物质或活 性物质的混合物。

还应将所述微囊理解为包括微球、微粒、毫微囊、毫微球或毫 微粒。所述聚合物的含义应为聚合物、共聚物或这些个体的任意混 合物。最后，应将所述活性物质的含义理解为活性物质、其一种盐、 其一种前体或上述化合物的任意混合物。

适用于本发明组合物的活性物质的盐可具体包括：由有机酸形 成的盐，如乙酸盐、苹果酸、酒石酸盐、草酸盐、富马酸盐、柠檬 酸盐、乳酸盐、硬脂酸盐、扑酸盐(1，1’-亚甲基-二(2-羟基-3-萘 甲酸)盐)、甲磺酸盐或对-甲苯磺酸盐；由无机酸形成的盐，如盐 酸盐、硫酸盐、磷酸盐或氢溴酸盐。优选采用通过与例如乙酸以阳 离子形式发生成盐作用获得的水溶性产物。但是，也可以采用不溶 性盐，例如(1，1’-亚甲基-二(2-羟基-3-萘甲酸)盐)。

本发明具体涉及一种含有可生物降解聚合物或共聚物型赋形剂 或此类赋形剂的混合物以及活性物质或活性物质混合物的呈微囊或 植入物形式的组合物，所述微囊或植入物能够在长达3个月或更长 的时间内以基本单相的释放模式释放活性物质或其混合物，所述组 合物的特征在于： -当组合物为微囊形式时：

·所述聚合物或共聚物在氯仿中的粘度介于0.7dl/g-1.6dl/g之 间，并且该微囊的制备过程中不包括所述微囊的溶化阶段，

·或所述聚合物或共聚物在氯仿中的粘度介于0.5dl/g-1.6dl/g， 并且所述聚合物或共聚物具有亲水特性； -当所述组合物为植入物形式时，所述聚合物或共聚物在氯仿中的粘 度为0.5dl/g-1.6dl/％。

适用于本发明组合物的聚合物或共聚物在氯仿中的粘度优选至 少等于0.9dl/g。

特别适用于本发明的聚合物或共聚物尤其可以是聚合物如乳 酸、乙醇酸、柠檬酸或苹果酸的聚合物，或是其它可生物降解聚合 物如聚-β-羟基丁酸、聚原酸酯、聚原碳酸酯、聚-α-氰基丙烯酸酯、 聚草酸链烷二醇酯如聚草酸丙二醇酯或丁二醇酯、聚氨基酸等。也 可以采用共聚物，如PLGA、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸、甲基丙烯酸 /丙烯酸共聚物、聚氨基酸、马来酸酐共聚物、乙基纤维素、硝基纤 维素、乙酰基纤维素等。这些聚合物或共聚物可以单独使用也可混 合采用。通常，PLGA含有40-90％丙交酯以及10-60％乙交酯。优 选采用D，L-PLGA，并且更优选采用由70-80％DL-丙交酯和20-30％ 乙交酯制成的D，L-PLGA。特别适用于本发明的是由75％DL-丙交酯 和25％乙交酯合成的PLGA。

另一种特别适用于本发明的聚合物是由L-丙交酯和乙交酯制成 的L-PLGA。与具有相同粘度的D，L-PLGA相比，L-PLGA释放速度更 缓慢并且可以被用作粘度更高的D，L-PLGA的替代物。

从常规方式来说，适宜采用具有亲水特性的聚合物或共聚物。 所以，一般优选由疏水性起始物如十二烷醇开环制得的PLGA和由亲 水性起始物如乳酸或乙醇酸开环得到的PLGA。

亲水性聚合物或共聚物，是指其中端链具备极性(例如端链的末 端是酸性官能团)的聚合物或共聚物，这与具有非极性端链(例如端 链为脂肪链)的疏水性聚合物或共聚物相反。

酸值对于聚合物或共聚物的亲水性或疏水性来说似乎是最相关 的参数，所谓酸值是对1克聚合物中和游离酸度所需的氢氧化钾毫 当量数。由于聚合物或共聚物的端链可以带有游离酸官能团，所以， 可以依据单体特性测定酸值。

本申请人发现，通常情况中，亲水性聚合物产生一种较好的缓 释曲线。所以，适用于本发明的聚合物的酸值优选至少等于1，更好 地至少等于1.2，并且更优选至少等于1.5或2。

本发明所述微囊的活性物质含量，即内部负荷，即微囊内纯净 肽的重量相对于微囊总重量的比例通常为0-20％，优选为2-15％。 对于曲普瑞林乙酸盐，其可释药约3个月的剂型的负荷优选小于或 等于10％，并且更优选4-8％。对于兰瑞肽乙酸盐，其负荷优选为 10～20％。

在植入物中，活性物质负荷一般为0-30％，并且适宜为15-25％。

包封步骤可以称作凝集，如美国专利US3 773 919或欧洲专利 EP52 510所述。

也可以采用所谓的熔融-挤出法，如欧洲专利EP58 481或美国 专利US5 225 205所述，随后视具体情况而定以常规方法研磨所得 产物得到微粒。

另一方面，可以采用水溶性活性成分，例如肽的水溶性盐(如乙 酸盐)。也可以采用可溶性化合物的不溶性盐，例如肽的脂肪酸盐(如 肽的扑酸盐)，如同在例如英国专利GB2 209 937中所述的。

利用本发明所述聚合物、经熔融-挤出法制成的组合物也可以以 植入物形式提供并且可被直接投入使用。

适宜采用直径约为1mm，例如0.8-1.2mm的小植入物(小型植入 物或微型植入物)。这些植入物的长度可在例如10-35mm之间，如约 25mm。含有低剂量活性成分例如每个植入物含有约3mg曲普瑞林乙 酸盐的植入物产生非常好的结果。此类植入物可以在长达3个月或 更长的时间内释放活性成分。

此外，我们发现，活性成分的构型也会对产品的扩散产生影响。 特别是如果活性成分可以结晶或无定形形式得到时，不能随意地对 两种形式进行选择。

专利申请EP709 085中描述了含有聚合物和无定形水溶性活性 物质的微囊。其中具体阐述了获得小颗粒(优选粒度小于10m)活性 物质的重要性。但是，该专利申请没有公开任何制备这种颗粒的方 法，并且未提及活性成分颗粒的比表面对含有这些颗粒的组合物的 释放性能所产生的影响。如今，本申请人业已从1986年始采用含有 无定形活性物质的微囊，也就是采用含有3.75mg以Decapeptyl商 品名销售的曲普瑞林乙酸盐的微囊，其粒度只有约8μm。然而，迄 今发现，粒度不是唯一的有利于缓释药物长达3个月以上时间的决 定性参数。

原则上说，对于例如肽类或蛋白质类的产品而言无定形特征并不 会产生问题，这些产品的制备方法，特别是冷冻干燥法在多数情况 中产生的是无定形产物，例如Decapeptyl 3.75mg。

在文献中已对这种现象作了大量描述，并且特别值得提及的是 下列文章：Hsu，C.C.等人，《药物研究》，12(1)，68-77(1995)或 Towns，J.K.《色谱学杂志》，A，705(1)，115-27(1995)。

所以，本发明还涉及一种微囊或植入物形式的组合物，该组合 物含有至少一种优选为高分子量的可生物降解聚合物或共聚物以及 至少一种高比表面的水溶性活性物质。具体来说，所述比表面大于 2m2/g，并且优选大于3m2/g。更优选所述比表面大于5m2/g或10m2/g。 特别优选所述比表面大于20m2/g，首选大于30m2/g。

本发明优选地涉及其中水溶性活性物质是蛋白质或肽的上述组 合物。

本发明还涉及其中聚合物或共聚物在氯仿中的粘度为0.5- 1.6dl/g，优选0.9-1.6dl/g的上述组合物。尤其是应选用粘度为 0.7-1.3dl/g的聚合物或共聚物，并且更优选粘度为0.9-1.3dl/g 的聚合物或共聚物。尤其适用的聚合物是PLGA。所述PLGA适宜由 40-90％丙交酯和10-60％乙交酯，更优选含有70-80％丙交酯和 20-30％乙交酯制备。掺混在所述微囊或植入物中的水溶性活性物质 优选是蛋白质类或肽类。

在优选的含有高比表面活性物质的组合物中，聚合物或共聚物 在氯仿中的粘度在0.5-1.6dl/g之间，并且所述聚合物或共聚物具 有亲水特性，聚合物或共聚物的酸值大于1毫当量(meq)KOH/克聚 合物或共聚物，优选大于1.2meq，更优选1.5meq或2meq KOH/克聚 合物或共聚物。

本发明还涉及含有高比表面活性物质的微囊或植入物形式的组 合物，其特征在于所述聚合物或共聚物为PLGA，优选由70-80％丙 交酯和20-30％乙交酯制成的PLGA，所述PGA在氯仿中的粘度为 0.5-1.6dl/g，并且混在微囊或植入物内的活性物质为蛋白质或肽。

与某些采用低分子量聚合物的其它制剂相比，这些微囊或植入 物能够呈现出一个单相释放曲线，其中的起始峰(或突起)降低，由 此使这些微囊或植入物能够在长达3个月或更长的时间内释放活性 物质。

换言之，本申请人发现，对于微囊或植入物形式的组合物，具 体如基于PLGA和包括肽或蛋白质作为活性成分的组合物来说，其释 放性质，特别是单相型释放作用可以在至少下列特性之一存在的条 件下得到显著改进： a)所述聚合物或共聚物是PLGA，其在氯仿中的粘度高于0.5dl/g， 优选高于0.9dl/g且原则上低于1.6dl/g； b)所述聚合物或共聚物是由70-80％丙交酯和20-30％乙交酯制成 的PLGA； c)所述聚合物或共聚物具有亲水特性，并且其酸值优选地大于1meq KOH，更优选大于1.2或1.5meq KOH/克聚合物或共聚物； d)所述活性成分，优选是肽或蛋白质，具有高比表面并且大于 2m2/g，优选大于10m2/g，更优选大于20m2/g或30m2/g。 这些特征可以视具体情况而定与L-PLGA而不是与D，L-PLGA的使用 相结合。

根据申请人所了解到的实际情况，申请人估计特性d)自身非常 重要并且可以有利地与其它特性a)、b)或c)相结合。具体地，特性 d)可以与下列特性相结合：单独a)、单独b)、单独c)、a)+b)、a)+c)、 b)+c)或a)+b)+c)。更优选地，使特性d)与至少特性c)相结合。

在适合本发明不同需要的活性物质中，特别值得提及的是蛋白 质类和肽类。所述活性物质可选自：曲普瑞林或其盐，具体如曲普瑞 林乙酸盐；兰瑞肽或其一种盐，具体如兰瑞肽乙酸盐；奥曲肽或其一 种盐(如欧洲专利EP29 579所述)，具体如奥曲肽乙酸盐或扑酸盐；具 有LH-RH活性的化合物，如曲普瑞林、戈舍瑞林、亮丙瑞林、布舍瑞 林或其盐；LH-RH拮抗剂；GPIIb/IIa拮抗剂；具有与GPIIb/IIa拮抗 剂相似活性的化合物；促红细胞生成素(EPO)或其类似物；不同类型的 干扰素-α、干扰素-β或-γ；生长激素释放抑制因子；生长激素释放抑 制因子衍生物(如欧洲专利EP 215 171中公开的)；生长激素释放抑制 因子类似物(如美国专利US5 552 520中公开的，该专利中还包括了其 它公开了生长激素释放抑制因子类似物的专利的目录，这些文献均引 入本申请作为参考)；胰岛素；生长激素；生长激素释放因子(GRF)； 生长激素释放肽(GHRP)；表皮生长因子(EGF)；促黑素细胞素(MSH)； 促甲状腺素释放激素(TRH)或其盐或其衍生物；甲状腺刺激激素 (TSH)；促黄体素(LH)；促滤泡素(FSH)；甲状旁腺素(PTH)或其衍生 物；溶菌酶盐酸盐；甲状旁腺素相关肽(PTHrp)；和人体PTH激素的 N-末端肽片段(1→34位)；后叶加压素或其衍生物；催产素；降钙素； 与降钙素具有相似活性的降钙素衍生物；降钙素基因相关肽 (CGRP)；高血糖素；高血糖素相似肽(GLP)；胃泌素；胃泌素释放肽 (GRP)；肠促胰液肽；促胰酶素；缩胆囊素；血管紧张素；人胎盘催 乳激素；人绒毛膜促性激素(HCG)；脑啡肽；脑啡肽衍生物；集落刺 激因子(CSF)；内啡肽；京都酚；白介素类，例如白介素-2；吞噬细 胞激素；胸腺生成素；胸腺刺激素；胸腺激素因子(THF)；胸腺血清 因子(TSF)；胸腺血清因子(TSF)衍生物；胸腺素；胸腺因子X；肿 瘤坏死因子(TNF)；胃动素；铃蟾肽或其衍生物(如美国专利US5 552 520所述，该专利还包括了其它公开了铃蟾肽衍生物的专利的目录， 这些文献均引入本申请作为参考)；催乳激素；神经降压素；强啡肽； 雨蛙肽；P物质；尿激酶；天冬酰胺酶；缓激肽；激肽释放酶；神经 生长因子；凝血因子；多粘菌素B；多粘菌素E；短杆菌肽；杆菌肽； 蛋白质合成刺激肽；内皮素拮抗剂或其盐或其衍生物；血管活性肠 肽(VIP)；促肾上腺皮质激素(ACTH)或其片段；血小板衍生生长因子 (PDGF)；骨形态发生蛋白(BMP)；垂体腺苷酸环化酶活化多肽 (PACAP)；神经肽Y(NPY)；肽YY(PYY)；肠抑胃肽(GIP)；和多核苷 酸，具体如双链RNA(ds-RNA)，如专利申请EP0300680或法国专利2 622 586所述。

优选地，将ds-RNA理解为与聚尿苷酸复合的聚腺苷酸，也称作 聚(A)-聚(U)或聚腺苷尿苷酸(poly-adenur)。其它RNA也适用于本 发明，具体如聚肌苷酸与聚胞苷酸的复合物，其也可称作聚(I)-聚 (C)，以及通过在这种聚胞苷酸链中引入尿苷酸获得的改性复合物， 例如由HEMISPHERx公司提供的产品扩增基因(Ampligen)(这些产品 具体公开在欧洲专利申请EP0 300 680中)。ds-RNA优选地通过法 国专利2 622 586中所述方法制备。

当上述活性物质为水溶性物质或被转化为水溶性物质时，就可 以获得高比表面，所述转化方式可例如是成盐作用或在结构中引入 水溶性链。这对于上述肽类和蛋白质类物质来说特别有效。在本发 明这方面来说，所属领域技术人员可以采用其它任何认为适当的水 溶性活性物质或其盐或其前体，特别是与乙酸成盐制得的盐。

根据本发明的一个优选方面，具有高比表面的肽或蛋白质选自 曲普瑞林乙酸盐、兰瑞肽乙酸盐或奥曲肽乙酸盐。

在本申请中应将肽和/或蛋白质理解为肽和/或蛋白质本身以及 这些肽类或蛋白质类的药理活性片段、盐或衍生物。

用于制造本发明所述微囊或植入物的水溶性活性物质，具体如 曲普瑞林乙酸盐、兰瑞肽乙酸盐和奥曲肽乙酸盐、戈舍瑞林、亮丙 瑞林、布舍瑞林或其盐优选通过一种主要包括两个步骤的方法获 得： -冷冻干燥步骤，其中包括将水溶性物质的稀溶液快速浸渍在温度 低于-50℃，优选低于-70℃的介质内；和 -视具体情况而进行的研磨步骤，其中优选地包括超声研磨。

应将活性物质的稀溶液理解为所述活性物质的浓度小于其饱和 浓度的一半并且优选小于其饱和浓度的四分至一的溶液，条件是其 饱和浓度至少等于200g/l。此方法制备出高比表面的活性物质。

快速浸渍应被理解为与低温介质相接触，从而引起水溶性物质 的溶液瞬时冻结。

对于冷冻干燥而言，在进行实际冻干前，该溶液可以在例如处 于液氮罐中的浮盘内冷冻。

为了获得最大比表面，对溶液的快速浸渍优选地历经将活性物 质溶液微粉化的过程。当首先将活性物质溶液微粉化时，低温介质 的温度可以只低于-50℃。

例如，为了获得极高的比表面，可以选择将溶液通过喷雾器喷 雾到极低温的金属盘上。金属盘的温度优选地低于-50℃，更优选低 于-70℃，甚至-80℃或-120℃。例如通过将金属盘浸渍在极低温介 质如液氮中可以获得这样的温度。按照本发明的一个优选方案，所 述金属盘为凹形并且利用喷雾器将溶液喷雾到该盘内。

也可以考虑采用其它冷冻技术，例如将活性物质的溶液喷雾到 该活性物质的预冷非溶剂浴中。所述非溶剂优选是液化气体，例如 液氮。

另一种可能的作法是在转鼓式致冷机上冷冻活性物质溶液。如 上所述，在进行该冷冻过程之前，优选对活性物质溶液进行微粉化 处理。

当为了制备本发明所述缓释微囊或植入物而采用在盘中冷冻活 性物质的方法时，优选活性物质的比表面在冷冻干燥后和研磨前大 于2m2/g。更优选地，活性物质的比表面大于3m2/g，甚至大于5m2/g。

若需要使比表面大于10m2/g，则优选采用包括微粉化步骤的方 法。活性物质在冷冻干燥后获得的比表面优选大于15m2/g。此比表 面更优选大于20m2/g甚至大于30m2/g。

为了得到不同的比表面，可通过改变参数例如冷冻速度或溶液 浓度使活性物质溶液的冷冻条件发生变化。

活性物质的比表面是获得长时间缓释的有利因素，对于微囊来 说尤其如此。事实上已提出，粒度相同但比表面不同的活性物质颗 粒对于相同的高分子赋形剂来说将产生完全不同的结果。

所以，本发明还涉及适用于水溶性生物活性物质的上述制备方 法以及由此方法获得的具有高比表面的水溶性生物活性物质。

具体来说，本发明涉及由上述方法制得的曲普瑞林乙酸盐、兰瑞 肽乙酸盐或奥曲肽乙酸盐，或双链RNA，优选地由此类方法制得的聚 腺苷酸复合聚尿苷酸。

如上指出，本发明组合物优选被用于制药领域。所述药物组合 物可以通过不同途径施用给病患，但是，优选经皮下或肌肉内给药。 可将本发明所述微囊首先悬浮在适于注射的载体中，例如氯化钠水 溶液或甘露糖醇水溶液。

除非另有定义，本文所用的全部科技术语具有本发明所属技术 领域的常用含义。另外，在此提及的所有出版物、专利申请、专利 以及其它参考文献引入本申请作为参考。

下列实施例用于说明上述方法，但不可理解为对本发明范围构 成限定。 实施例

对于这些实施例，特性粘度(IV)是通过常规的流动时间测定法， 例如《欧洲药典》，1997，17-18页(毛细管测定法)测出；除非另有 说明，这些粘度均在在氯仿中和25℃下以0.1％的浓度测定，或于 30℃下在六氟异丙醇中以0.5％的浓度测定。在测定中，活性物质的 比表面是通过所谓的BET法(对活性物质表面上氮单层的吸收)测 定，这是一种本领域技术人员熟知的方法。

对于下列实施例，按照本发明所述冷冻干燥过程得到的肽称作 “改性”肽，与“未改性”肽相对照，“未改性”肽是以常规方法 进行冻干(未经过猝发式低温浸渍) 实施例1

将16.620g“未改性”曲普瑞林乙酸盐溶解在554ml水中。将 溶液在置于液氮罐中的浮盘内冷冻，随后冻干。

由此得到15.18g“改性”曲普瑞林乙酸盐，收率为91.34％。 此化合物具有4.7m2/g的比表面，冷冻干燥前的比表面为0.8m2/g。

随后，将曲普瑞林乙酸盐超声粉碎：对于改性肽来说15分钟就 足以获得粒度小于10μm的颗粒(对于未改性肽来说需要30分钟才 能够获得如此的粒度)。

随后按照欧洲专利EP52 510和美国专利US 3 773 919中所述 的凝聚方法进行包封步骤，以3.378g上述碎化的改性曲普瑞林乙酸 盐和D，L-PLGA(D，L-PLGA由75％DL-丙交酯和25％乙交酯组成，在 氯仿中的特性粘度＝0.70dl/g，酸值＝1.61meq KOH/g)的7.30％二 氯甲烷溶液为起始物。加入390ml硅油以便通过凝聚作用形成微囊。 浸渍在庚烷浴(22L)中并且在10μm的膜上过滤后回收所述微囊。 实施例2

将超声碎化30分钟后粒度为8μm的0.338g未改性曲普瑞林乙 酸盐在搅拌条件下加入到D，L-PLGA(PLGA与实施例1中的PLGA等量) 的7.30％二氯甲烷溶液中。加入40ml硅油以形成微囊，随后在庚 烷浴(2L)中沉淀并且再在10μm的膜上过滤。 实施例3-6

将0.338g曲普瑞林乙酸盐按照上面表1中所述的条件改性，随 后超声碎化，再将其加入到溶于二氯甲烷中的三种D，L-PLGA(其特 性如下表2所示)的33.3％/33.3％/33.3％混合物的7.30％溶液中。 加入40ml硅油以形成微囊，随后在庚烷浴(2L)中沉淀并且再在10 μm的膜上过滤。

                                表1    实施例    浓度(g/l) 曲普瑞林乙酸   盐含量(g)   水的用量     (ml)     比表面     (m2/g)     3     4     5     6     200     150     100     50     3     3     3     3     15     20     30     60     4.4     4.7     4.8     7.3 (未改性)曲普瑞林乙酸盐丁酸起始物的比表面为0.8m2/g。

三种混合聚合物的物理化学特性列于表2中：     特性     第一种PLGA     第二种PLGA   第三种PLGA 丙交酯/乙交酯比例   氯仿中特性粘度(dl/g) 酸值(meq KOH/g)     D，L-PLGA     50∶50     0.47     2.68     D，L-PLGA     75∶25     0.61     2.08     D，L-PLGA     75∶25     0.70     1.61 实施例7

将22.560g“未改性”兰瑞肽乙酸盐溶解在752ml水中。将该 溶液在置于液氮罐中的浮盘内冷冻，随后冻干。得到21.75g“改性” 兰瑞肽乙酸盐，收率为96.41％，此化合物具有4.4m2/g的比表面。

随后按照欧洲专利EP52 510和美国专利3 773 919中所述的凝 聚法进行包封步骤，以7.5g上述碎化的改性兰瑞肽乙酸盐和D，L- PLGA(D，L-PLGA由50％DL-丙交酯和50％乙交酯组成，在HFIP中的 特性粘度＝0.55dl/g)的3.70％二氯甲烷溶液为起始物。加入650ml 硅油以便通过凝聚作用形成微囊。浸渍在庚烷浴(30L)中并且在10 μm的膜上过滤后回收所述微囊。 实施例8和9

用不同重均分子量(Mw)的D，L-PLGA(由75％DL-丙交酯和25％乙 交酯组成)来制造曲普瑞林乙酸盐的微囊。采用比表面为4.7m2/g的 曲普瑞林乙酸盐、按照实施例1所述方法制备微囊。

实施例8和9的物理化学参数如下表所示：   实施例     Mw THF     IV CHCl3(dl/g)   酸值(meq KOH/g)     8     9     58,400     132,650         0.61         0.93        2.08        1.31 实施例10：

按照实施例1所述的方法、采用具有疏水趋势的D，L-PLGA(该 D，L-PLGA由75％DL-丙交酯和25％乙交酯组成；在THF中测得的分 子量：80100；在氯仿中的特性粘度：0.75dl/g；酸值＝0.40meq KOH/g) 制备微囊。 实施例11：

按照实施例1所述的方法、采用有结晶趋势的L-PLGA(该L-PLGA 由75％L-丙交酯和25％乙交酯组成；在THF中测得的分子量： 99260；在氯仿中的特性粘度：0.78dl/g；酸值＝1.80meq KOH/g)为 起始物制备微囊。 实施例12：

将1重量份的曲普瑞林乙酸盐加入到4重量份的粉化D，L- PLGA(该PLGA由75％丙交酯和25％乙交酯组成；在THF中测得的分 子量：103810；在氯仿中的特性粘度：0.82dl/g)中。

用400μm筛将固体块破碎，将产物以42rpm的转速混合20分 钟并且将该混合物在120℃下用一个位于螺旋挤压机上的直径为1mm 的挤压模挤出。随后将挤出物在空气中冷却并且通过拉丝使其最终 的直径达到0.85mm。

测定每单位长度(mm)的混合物浓度，并且将挤出物棒切成预定 长度(在此为24mm)，得到含有3mg曲普瑞林的微型植入物。最后， 检测各微型植入物的重量。 实施例13和14

这两个实施例采用同样的方法：

5g兰瑞肽乙酸盐溶解在水中以达到所选择的浓度(例如，加入 167ml灭菌水，所得浓度为30g/l)。用500ml的喷雾器将这种溶液 雾化，调节喷雾流得到尽可能细的液滴。将所得液滴喷雾在底部浸 渍在液氮中的盘中。在操作前在盘内放置两根温度计，以便监测产 物的温度变化。

一旦产物被冻结，将盘插入到底盘温度约为-54℃的冷冻干燥器 中。

用1小时使产物温度和底盘温度达到平衡。这可以诱发升华阶 段(将底盘温度设定在20℃并且罐内压力为100μbar)。此阶段持续 约30小时。产物的平均最终温度为13℃。随后进行约24小时的二 次干燥(罐内压力50μbar)。产物的平均最终温度是20℃。

所用反应物和产物的特性概括在下表中：           特性    实施例13    实施例14 兰瑞肽乙酸盐的用量(g)     5.00     5.00 溶液浓度(g/l)     30     10 兰瑞肽乙酸盐的回收量(g)     4.54     4.10 所得比表面(m2/g)     36     43

将上述(实施例14)得到的比表面为43m2/g的兰瑞肽乙酸盐按 照下列方法混合到微囊内：

在玻璃管中称量0.782g兰瑞肽乙酸盐。将15ml二氯甲烷加入 到该肽盐中。用装备有放大器和浸插探针或平头探针的超声发生器 将上述肽超声粉碎(频率＝50Hz，功率＝250W；粉碎持续约15分钟)。

随后按照欧洲专利EP52 510和美国专利3 773 919中所述的凝 聚法使用0.782g上述碎化的兰瑞肽乙酸盐和溶于35ml二氯甲烷中 的4g 50∶50D，L-PLGA(在氯仿中的IV＝0.48dl/g)溶液进行包封步 骤。加入34.2ml硅油以便通过凝聚作用形成微囊。浸渍在庚烷浴 (2.5L)中并且在10μm的膜上过滤后回收所述微囊。

随后将所得的微球真空干燥，分装到瓶中并且与赋形剂(例如惰 性物质或表面活性剂)一起冷冻干燥，以确保储存在良好的条件下并 且易于得到微囊的悬浮液。 实施例15和16：

这两个实施例采用与实施例1相似的方法。所用的肽也相同。 但所用PLGA的特征、肽(此两个实施例采用改性曲普瑞林乙酸盐)的 用量以及微囊的制备参数如下表所示：             特性    实施例15    实施例16 改性曲普瑞林乙酸盐的用量(g)     2.58     2.58 聚合物用量(g)     30     30 硅油用量(ml)     600     650 二氯甲烷用量(ml)     812     812 丙交酯/乙交酯比例     75/25     75/25 PLGA在氯仿中的粘度(dl/g)     0.96     0.96 测定的酸值     1.22     1.12 对本发明微囊的释放曲线的研究

为了说明本发明微囊的价值，对其体外释放曲线作了研究：

将实施例1-11和15-16各取3个约25mg(实施例7取约20mg) 的微囊样品置于4ml 0.9％氯化钠溶液中，分别测定其释放性能。 在37℃下，在1小时、1天和4天后提取释放到溶液中的药物。

利用高效液体色谱(HPLC)、相对于校准范围、在三氟乙酸(TFA) 体系中以梯度模式测定曲普瑞林。为了得到曲普瑞林的标准范围， 按照下列方法制备溶液T1：将约7.5mg参比曲普瑞林乙酸盐样品置 于50ml烧瓶中；用0.1％乙酸溶液配制到50ml。由溶液T1制备溶液 T2和T3：对于T2，取10ml溶液T1并且用0.1％乙酸溶液配制到20ml。 对于溶液T3，取1ml溶液T1并且用0.1％乙酸溶液配制到50ml。

按照类似的方法通过HPLC测定兰瑞肽。为了得到兰瑞肽的校准 范围，按照下列方法制备溶液T’1：将约16.5mg参比兰瑞肽乙酸盐 样品置于50ml烧瓶中；用0.1％乙酸溶液配制到50ml。由溶液T’1 制备溶液T’2、T’3、T’4和T’5：对于T’2，取10ml溶液T’1并且用0.1 ％乙酸溶液配制到25ml。对于溶液T’3，取5ml溶液T’1并且用0.1 ％乙酸溶液配制到25ml。T’4通过将2ml溶液T’1用0.1％乙酸溶液稀 释到总体积为25ml制得。溶液T’5通过将1ml溶液T’1用0.1％乙酸 溶液稀释到总体积为25ml制得。

以相对于曲普瑞林乙酸盐或兰瑞肽乙酸盐的起始含量的百分比 (100％)计，测定曲普瑞林乙酸盐或兰瑞肽乙酸盐的量，这可作为参比。

该体外试验的结果概括在下表中：   实施例           释放的总量(％)    1小时     1天     4天     1     8     16     27     2     9     47     57     3     10     45     67     4     10     37     65     5     9     41     66     6     8     30     55     7     3     14.5     28.3     8     11     40     67     9     2     4     6     10     5     12     14     11     1     2     2     15     2     4     13     16     2     5     10

体内试验的结果与那些体外试验完全相关。例如，将实施例1的 微囊以1.2mg/kg的剂量肌内注射到大鼠体内。对血浆的分析揭示了 曲普瑞林的量在超过90天的期间内恒定地保持在0.1ng/ml以上。 对实施例2的微囊进行的相同研究显示出睾酮的量在超过90天的期 间内恒定地保持在1ng/ml以下。此外，将实施例9的微囊以1.2mg/kg 的剂量肌内注射到大鼠体内，对血浆的分析揭示了曲普瑞林的量在 超过90天的期间内恒定地保持在0.1ng/ml以上。

按照下列方法对实施例12的微型植入物进行体内试验：在每只 短腿小猎兔犬(体重约12kg)的后爪肌肉内注射总剂量为3mg的曲普 瑞林。血浆分析揭示出，曲普瑞林的量在超过90天的期间内恒定地 保持在0.1ng/ml以上。